糖尿病患者の歯周病悪化を誘発する新規因子の網羅的な解析および同定

糖尿病患者牙周病恶化新因素的综合分析与识别

基本信息

批准号：
18791592
负责人：
成石浩司
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は糖尿病患者における歯周病悪化の病態形成に関わる因子を網羅的に捉えるために,平成18年度に実施した遺伝子マイクロアレイの結果をもとに,動物モデルを用いて検証した。【材料および方法】1.実験動物:市販のKKayマウス(雄性,10週齢)およびC57BLマウス(雄性,10週齢)を用いた(日本クレア社)。2.免疫組織学的検討:KKayマウスおよびC57BLマウスの歯周組織および腎臓を回収し,4%パラホルムアルデヒド液に浸漬した後,MMP-3を標的として免疫組織染色を外注して行った(バイオ病理研究所,大分)。3.血清中MMP-3産生量の測定:マウス血清中のMMP-3濃度は,市販のELISAキット(R&D)を用いて定量した。MMP-3濃度の有意差は,Student's t-testを用いて検定した。4.細胞:ヒト歯肉由来線維芽細胞を用いDMEM中で培養した。5.カテプシン活性:dNCREBを細胞にトランスフェクションした後,通法に従いカテプシン活性を測定した。【結果】1.KKayマウスの歯肉組織におけるMMP-3発現は,対照マウスと比較して,とりわけマクロファージ系の細胞において増強されている傾向があった。腎臓組織では,逆にKkayマウスで抑制されている傾向があった。2.KKayマウスの血清中のMMP-3濃度は,対照マウスと比較して有意に抑制されていた(P<0.05)。3.CREB活性を抑制した細胞のカテプシン活性は有意に抑制された。【結論および考察】高血糖マウスの歯周組織におけるMMP-3の発現充進は,糖尿病患者にみられる歯周病悪化に関与する可能性を示唆する。しかしながら,血清あるいは腎臓におけるMMP-3発現抑制に起因する糖尿病病態の解明は将来の研究課題である。また,歯肉線維芽細胞のカテプシン活性の制御にCREB経路が関与することが明らかになった。これらが,歯周組織の破壊メカニズムの一翼を担う可能性が示唆された。

今年，为了全面了解糖尿病患者牙周病恶化的发病机制，我们利用动物模型验证了2006年进行的基因芯片的结果。 [材料和方法] 1.实验动物：使用市售的KKay小鼠(雄性，10周龄)和C57BL小鼠(雄性，10周龄)(Clea Japan)。 2.免疫组织学研究：收集KKay小鼠和C57BL小鼠的牙周组织和肾脏，浸入4%多聚甲醛溶液中，然后外包（大分县生物病理学研究所）进行针对MMP-3的免疫组织学染色。 3.血清中MMP-3产生的测量：使用市售的ELISA试剂盒(R&D)对小鼠血清中的MMP-3浓度进行定量。使用 Student t 检验测试了 MMP-3 浓度的显着差异。 4.细胞：使用人牙龈来源的成纤维细胞并在DMEM中培养。 5.组织蛋白酶活性：用dNCREB转染细胞后，按照标准方法测定组织蛋白酶活性。结果：1.与对照小鼠相比，KKay小鼠牙龈组织中MMP-3的表达有增强的趋势，尤其是巨噬细胞系细胞中。相反，在 Kkay 小鼠的肾组织中，它有被抑制的趋势。 2.与对照小鼠相比，KKay小鼠血清中MMP-3浓度明显受到抑制(P<0.05)。 3.CREB活性被抑制的细胞中的组织蛋白酶活性被显着抑制。 [结论与讨论]高血糖小鼠牙周组织中MMP-3的表达增强提示其可能参与了糖尿病患者牙周病的加重。然而，阐明血清或肾脏中 MMP-3 表达抑制引起的糖尿病病理是未来的研究课题。研究还表明，CREB 途径参与调节牙龈成纤维细胞中的组织蛋白酶活性。有人认为这些可能在牙周组织破坏机制中发挥作用。