ミャンマーにおけるインフルエンザウイルスの薬剤耐性と分子疫学

缅甸流感病毒的耐药性和分子流行病学

• 批准号: 12F02104
• 负责人: 齋藤 玲子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12F02104/
• 关键词: インフルエンザウイルス; ミャンマー; 熱帯亜熱帯; 薬剤耐性; ノイラミニダーゼ阻害剤; M2阻害剤; 薬剤感受性試験; サイクリングプローブ法; ヤンゴン市; ネピドー市; 薬剤耐性ウイルス; ノイラミニダーゼ; リバースジェネティクス(RG)

平成24年度から平成25年度の2カ年にわたり、ミャンマーのヤンゴン市とネピドー市の二都市でインフルエンザ様疾患患者に対して迅速診断キットにてスクリーニングを行い、陽性の場合、ウイルス解析のために咽頭ぬぐい液を採取した。検体から新潟大学でインフルエンザウイルスを分離培養し、ウイルス型別を行った。A型インフルエンザの場合は、リアルタイムPCR(サイクリングプローブ法)により、薬剤耐性株のスクリーニングを行った。すなわち、M2阻害剤に耐性となるM2遺伝子31位の変異と、NA阻害剤に耐性となるNA遺伝子275位の変異の有無を確認した。NA阻害剤耐性については、さらに2通りの方法で検査を行った。1) MUNANAを使った蛍光法により50%阻止濃度を算出して薬剤感受性試験を行い耐性の有無を判定した。2) NA遺伝子の遺伝子解析を行い、耐性に関与するアミノ酸変異を確認した。2年間で合計835名の患者が、インフルエンザ迅速キット陽性であり、培養用の検体を採取した。ミャンマーでは、インフルエンザの流行は6-9月にみられ、ピークは7-8月であった。平成24年度は、A/H1N1pdm09亜型を25株、B型を79株分離し、平成25年度はA/H3N2亜型を62株、A/H1N1pdm09亜型を1株分離した。リアルタイムPCRによるA型インフルエンザのスクリーニングの結果、2年間に検出されたA/H1N1pdm09亜型の26株、A/H3N2亜型の62株は全てM2遺伝子の31位に変異をもつアマンタジン耐性株であった。A/H1N1pdm09亜型については、NA阻害剤耐性となる275位の変異をもつ株は検出されなかった。NA阻害剤に対する薬剤感受性試験は、A/H1N1pdm09亜型の25株と、B型の21株について施行した。結果は、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビルの4剤に対して全ての株が感受性であり、耐性株の出現は認められなかった。同様に、NA遺伝子のシークエンス解析から、耐性化につながる遺伝子変異(H275Y、E119Vなど)は検出されなかった。熱帯亜熱帯で、インフルエンザの薬剤耐性調査を行った報告はほとんどないため、我々の調査は貴重である。今後さらに詳細な解析を進めて、論文発表を行い結果の周知をはかる。

从2012财年到2013财年的两年时间里，在缅甸仰光和内比都两个城市使用快速诊断试剂盒对流感样疾病患者进行了筛查，如果呈阳性，则使用咽拭子进行病毒收集。新泻大学从标本中分离培养流感病毒，并对病毒进行分型。对于甲型流感，我们使用实时PCR（循环探针法）筛选耐药菌株。也就是说，我们确认了M2基因的第31位是否存在使其对M2抑制剂具有抗性的突变以及NA基因的第275位是否存在使其对NA抑制剂具有抗性的突变。使用两种方法进一步测试 NA 抑制剂抗性。 1)使用MUNANA通过荧光法计算50%抑制浓度，并进行药敏试验以确定是否存在耐药性。 2)对NA基因进行遗传分析，鉴定出与抗性相关的氨基酸突变。两年内共有 835 名患者的流感快速试剂盒检测结果呈阳性，并采集了标本进行培养。在缅甸，流感流行发生在6月至9月，高峰出现在7月至8月。 2012年分离出A/H1N1pdm09亚型25株、B型79株；2013年分离出A/H3N2亚型62株、A/H1N1pdm09亚型1株。通过实时PCR筛查甲型流感病毒，两年内检测到的26株A/H1N1pdm09亚型和62株A/H3N2亚型均为金刚烷胺耐药株，且其第31位突变。 M2 基因。对于A/H1N1pdm09亚型，没有检测到275位突变对NA抑制剂具有抗性的菌株。对25株A/H1N1pdm09亚型和21株B型菌株进行了NA抑制剂的药敏试验。结果显示，所有菌株对奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦、拉尼米韦四种药物均敏感，未观察到耐药菌株。同样，NA基因的序列分析也没有检测到导致耐药性的基因突变（H275Y、E119V等）。我们的研究很有价值，因为热带亚热带地区流感耐药性研究的报道很少。未来，我们将进行更详细的分析，并发表论文来传播结果。

项目成果

Effectiveness of Trivalent Influenza Vaccine among Children in Two Consecutive Seasons in a Community in Japan

• DOI: 10.1620/tjem.232.97
• 发表时间: 2014-02-01
• 期刊: TOHOKU JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE
• 影响因子: 2.2
• 作者: Suzuki, Tsubasa;Ono, Yasuhiko;Saito, Reiko
• 通讯作者: Saito, Reiko

Quantitative phosphoproteomic analysis of host responses in human lung epithelial (A549) cells during influenza virus infection

• DOI: 10.1016/j.virusres.2013.11.012
• 发表时间: 2014-01-22
• 期刊: VIRUS RESEARCH
• 影响因子: 5
• 作者: Dapat, Clyde;Saito, Reiko;Horigome, Tsuneyoshi
• 通讯作者: Horigome, Tsuneyoshi

Comparison of the Evolutionary Dynamics of Influenza A Viruses from Lebanon, Myanmar, and Japan, 2009-2013

2009-2013年黎巴嫩、缅甸和日本甲型流感病毒进化动态比较

• 发表时间: 2013
• 作者: Dapat Clyde;Dapat Isolde;近藤大貴;齋藤孔良;齋藤藤玲子;鈴木宏.;Dapat Clyde
• 通讯作者: Dapat Clyde

2007-10年にミャンマーで発生したインフルエンザA型H3N2の遺伝子的特徴

2007年至2010年缅甸发生的甲型H3N2流感基因特征

• 发表时间: 2012
• 作者: DAPAT;Clyde Pancito
• 通讯作者: Clyde Pancito

ミャンマーにおけるインフルエンザウイルスの分子疫学

缅甸流感病毒的分子流行病学

• 发表时间: 2013
• 作者: DAPAT;Clyde Pancito
• 通讯作者: Clyde Pancito