天疱瘡自己抗体の結合カイネティクスによる新たな病原性判定法の開発

基于天疱疮自身抗体结合动力学的致病性测定新方法的开发

基本信息

批准号：
17791489
负责人：
角田和之
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

尋常性天庖瘡(PV)はその自己抗原蛋白であるデスモグレイン3(Dsg3)に対する抗Dsg3抗体により水庖が形成される。これまでに我々はPVモデルマウスより抗Dsg3モノクローナル抗体(AK mAb)を複数単離し、新たな病原性を評価する方法として抗原と抗体の結合カイネティクスに注目し、表面プラズモンセンサー(Biacore)を用いてAK mAbとマウスDsg3蛋白及びヒトDsg3との結合解離係数(K_D)を算出し解析を行った。その結果マウスDsg3に対するK_D値は1.38×10^<-8>から4.81×10^<-10>で個々のmAbは異なるアフィニティを有していたものの、AK mAbのIn vivoにおける病原性と明らかな相関は認めなかった。そこで次にヒトDsg3に対するKn値を測定したところ5.61×10^<-7>から2.55×10^<-10>と同様に異なるアフィニティを有し、さらにmAbの結合アフィニティはin vitro dissociation assayを用いて検討した病原性と相関関係を有する事が確認された。実際の天庖術自己抗体はポリクローナル抗体であり、複数のエピトープが異なる抗Dsg3抗体が結合していると考えられる。そこで本度は異なる手法で作製したPVモデルマウスより単離した抗Dsg3mAb(NAK mA b)を用いて解析を行った。その結果異なるエピトープを認識するNAK1 mAb、NAK2 mAb、NAK7 mAb、NAK11 mAbを続けてアナライトとしてinjectionしたところNAK1 mAbとエピトープの競合するNAK7 mAbの結合は見られなかったものの、その他のNAK mA bは同時にDsg3分子上に結合できることが確認された。この結果よりIn vivoにおいても異なるエピトープを認識するDsg3抗体がDsg3分子上に同時に結合し接着障害を誘導している可能性が考えられた。以上より、Biacoreを用いた結合カイネティクス解析は天庖療の水庖形成機序の解明に有用な方法であると考えられた。

寻常网球 (PV) 是由抗 Dsg3 抗体针对其自身抗原蛋白桥粒芯糖蛋白 3 (Dsg3) 引起的。迄今为止，我们已从PV模型小鼠中分离出多种抗Dsg3单克隆抗体（AK mAb），并重点研究抗原和抗体的结合动力学，作为评估致病性的新方法，使用表面等离子体传感器（Biacore）进行结合。计算并分析AK mAb与小鼠Dsg3蛋白和人Dsg3蛋白之间的解离系数(K_D)。结果，小鼠Dsg3的K_D值范围为1.38×10^<-8>至4.81×10^<-10>，尽管各个mAb具有不同的亲和力，但很明显AK的体内致病性mAb 未观察到相关性。因此，当我们接下来测量人Dsg3的Kn值时，它显示出不同的亲和力，范围从5.61×10^<-7>到2.55×10^<-10>。此外，使用mAb的结合亲和力测定。体外解离试验证实与前期研究中检测的致病性存在相关性。实际的天上术自身抗体是多克隆抗体，并且认为具有多个不同表位的抗Dsg3抗体与其结合。因此，我们使用从使用不同方法产生的 PV 模型小鼠中分离出的抗 Dsg3 mAb (NAK mAb) 进行了分析。结果，当依次注射识别不同表位的 NAK1 mAb、NAK2 mAb、NAK7 mAb 和 NAK11 mAb 作为分析物时，在与表位竞争的 NAK1 mAb 和 NAK7 mAb 之间没有观察到结合，但其他 NAK mAb b被证实能够同时结合Dsg3分子。该结果表明，识别不同表位的Dsg3抗体可能在体内同时与Dsg3分子结合，从而诱导粘附失败。基于上述，使用 Biacore 的结合动力学分析被认为是阐明转生疗法中水形成机制的有用方法。