血清プロテオミクス解析によるGVHDの早期診断法の確立

血清蛋白质组学分析GVHD早期诊断方法的建立

• 批准号: 17790713
• 负责人: 堀 司
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790713/
• 关键词: GVHD; proteomics

1.GVHDマウスモデルの作製と病態推移の把握donorをC57BL/6、reciientをBALB/cとし8.5Gyの全身放射線照射後の骨髄細胞2x10^7個を輸注し、GVHDモデルとした。移植後day7、day14、day21、day28め症状と肝、消化管、皮膚の病理GVHD所見を呈した。組織の変化を経時的に把握し、病理組織所見はスコア化した。症状、病理組織ともにday7以降GVHD所見を呈した。2.モデルマスの血清プロテオミクス移植前、day7、day14、day21、day28に血清採取し、前処理後にSELDI-TOF-MSにて網羅的解析を行った。これらの結果をクロスバリデーション法により検討したところ、GVHD群(da7、da14、day21、day28)とコントロール群(移植前)との分類に有用なpeakが得られた。このpeakはGVHDモテルでda7以降有意な上昇を認めており、病理組織スコアが最高値に達する以前から高いpeak intensituを呈していた。なお、GVHDを発症しないsyngeneicの移植においては有意な変化を認めなかった。また、免疫抑制剤による治療を行ったGVHDモデルにおいては、投与後に症状の軽減とともに意なeakの低下が認められた。以上よりこのpeakは早期診断、治療効果判定ともに利用できる可能性が示唆され、病態マーカーのcandidateとした。3.candidateの同定このcandidateをimmunochromatography、RP-HPLC、2D-PAGEを用いて分離精製し、LC-MS/MSによって同定した。4.ヒトサンプルにおける検討マウスモテルにおいて同定された病態マーカーのヒトにおける有用性を現在検討中であり、今後ヒトでの診断システムの確立を目指す。本研究の成果は、特許出願を念頭におき準備を進めている。

1、GVHD小鼠模型的制作及病理进展的了解供体为C57BL/6，受体为BALB/c，8.5 Gy全身放射线照射后输注2x10^7骨髓细胞，制作GVHD模型。患者在移植后第7、14、21和28天出现症状和肝脏、胃肠道和皮肤的病理GVHD表现。随着时间的推移监测组织变化，并对组织病理学结果进行评分。从第 7 天起，症状和组织病理学均显示 GVHD 发现。 2.模型鳟鱼的血清蛋白质组学移植前第7、14、21、28天采集血清，预处理后采用SELDI-TOF-MS进行综合分析。当使用交叉验证方法检查这些结果时，获得了对于GVHD组（da7、da14、第21天、第28天）和对照组（移植​​前）之间的分类有用的峰。在GVHD模型中，该峰在da7后显着增加，甚至在组织病理学评分达到最大值之前峰强度就很高。此外，在未发生 GVHD 的同基因移植中未观察到显着变化。此外，在用免疫抑制剂治疗的GVHD模型中，给药后症状得到缓解，并且观察到eak显着降低。综上所述，提示该峰既可用于早期诊断，又可用于判断治疗效果，并被选为候选病理标志物。 3.候选物的鉴定使用免疫层析、RP-HPLC和2D-PAGE分离和纯化候选物，并通过LC-MS/MS进行鉴定。 4.人类样本研究我们目前正在研究小鼠模型中鉴定的病理标志物在人类中的有用性，并旨在未来建立针对人类的诊断系统。这项研究的结果正在准备中并考虑到专利申请。