多価不飽和脂肪酸によるマイクロドメイン形成と消化管薬物吸収促進作用との関連性

多不饱和脂肪酸形成微结构域与胃肠道药物吸收促进作用的关系

基本信息

批准号：
17790133
负责人：
大貫義則
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

様々な生理活性作用が知られる多価不飽和脂肪酸を食品や製剤添加物として消化管に適用すると、細胞膜マイクロドメインの形成変化が起こり、それによって薬物吸収性などの膜機能が変化するとの仮説を立て、モデル膜や培養細胞を用いた検討を行った。まず、組成の異なるモデル膜に各種脂肪酸を適用し、界面活性剤不溶性膜画分量や蛍光異方性などの測定を行った。その結果、ドコサヘキサエン酸(DHA)やエイコサペンタエン酸(EPA)の多価不飽和脂肪酸は、コレステロールを含まない膜に対しては非常に強力な膜流動化作用を示すものの、コレステロールを含む膜に対しては、その作用が著しく減弱することが明らかになった。さらに、オレイン酸のような不飽和脂肪酸と作用を比較したところ、両者の膜への作用様式は異なっていた。以上の結果から、多価不飽和脂肪酸がマイクロドメインの形成を促進させる可能性を見出した。すなわち、多価不飽和脂肪酸はコレステロールが豊富に含まれる膜領域(マイクロドメイン)には作用せず、膜に対して不均一に作用するため、結果として流動性の高い膜領域と低い膜領域の相分離を助長して、マイクロドメインの形成を促進する可能性が考えられる。続いて、この考察をもとに培養細胞(Caco-2)を用いて検討を行った。検討として、多価不飽和脂肪酸を適用した細胞から、界面活性剤不溶性膜画分と可溶性膜画分を分画し、それぞれのフラクションに含まれる膜タンパク量を評価した。なお、本研究では対象とする膜タンパクに、マイクロドメインへの分布が報告されているP糖タンパク(P-gp)を選択した。その結果、多価不飽和脂肪酸を適用しても、各フラクションのP-gp量に目立った変化は認められなかった。したがって、現在までのところ、モデル膜での結果を支持するような結果は得られていない。今後は条件を変えてさらに検討を進める予定である。

我们的假设是，当已知具有各种生理活性作用的多不饱和脂肪酸作为食品或药物添加剂应用于胃肠道时，细胞膜微区的形成会发生变化，从而改变膜功能，例如药物我们开发了一种模型膜并使用培养细胞进行了研究。首先，将各种脂肪酸应用于具有不同组成的模型膜，并测量表面活性剂不溶性膜组分的量和荧光各向异性。结果表明，二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等多不饱和脂肪酸对于不含胆固醇的膜具有非常强的膜流化作用，但对于含有胆固醇的膜，该作用显着。被削弱了。此外，当我们将它们的作用与油酸等不饱和脂肪酸的作用进行比较时，我们发现两者对膜的作用方式不同。基于以上结果，我们发现多不饱和脂肪酸可能促进微结构域的形成。换句话说，多不饱和脂肪酸不作用于富含胆固醇的膜区域(微区)，而是不均匀地作用于膜，导致具有高流动性的膜区域和具有低流动性的膜区域，据认为它可以促进相分离。并促进微区的形成。接下来，基于此考虑，我们使用培养细胞（Caco-2）进行了研究。作为一项研究，我们从用多不饱和脂肪酸处理的细胞中分离出表面活性剂不溶性膜组分和可溶性膜组分，并评估了每个组分中所含膜蛋白的量。在本研究中，选择据报道分布在微域中的P-糖蛋白（P-gp）作为靶膜蛋白。结果，即使使用多不饱和脂肪酸，各级分中的P-gp量也没有观察到明显的变化。因此，迄今为止，尚未获得支持模型膜结果的结果。未来我们计划通过改变条件进行进一步的研究。