コンドロイチン硫酸のTh1促進機序解明における分析化学的アプローチ

分析化学方法阐明硫酸软骨素的 Th1 促进机制

基本信息

批准号：
17790030
负责人：
酒井信夫
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute of Health Sciences (2006)Chiba University (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

平成17年度は,コンドロイチン硫酸がTh1促進活性を示すのに必要であると考えられているL-セレクチンと相互作用を示す糖鎖のスクリーニングを行い,その構造的特徴をHPLC, NMR及びMS等の各種分析機器を用いて明らかにした.そこで,平成18年度は,コンドロイチン硫酸を構成する分子群を化学的に調製し,活性発現に必要な「糖鎖コドン」について詳細に考究した.具体的には,サイズ排除クロマトグラフィーを用いて,クジラ軟骨及びウシ気管軟骨由来コンドロイチン硫酸の分画を行い,分子量の異なるコンドロイチン硫酸を調製した(クジラ軟骨由来コンドロイチン硫酸:7,9,12,15,21,29kDa,ウシ気管軟骨由来コンドロイチン硫酸:6,7,9,13,15,17,21,26,33kDa).なお,分画したコンドロイチン硫酸について,特異的分解酵素を用いて不飽和二糖を得た後,傾向誘導体化して高速液体クロマトグラフィーを用いて分析を行ったところ,分画前の二糖組成を保持していることが明らかとなった.表面プラズモン共鳴測定装置を用いて分画したコンドロイチン硫酸とL-セレクチンの相互作用解析を行った結果,21kDaのコンドロイチン硫酸が最も高い親和性を有し,分子量が小さくなるほど親和性が低下することを見出した.また,分画したコンドロイチン硫酸の抗原感作マウス脾細胞に対する免疫化学的活性を評価した結果,コンドロイチン硫酸の分子量依存的にIFN-γ産生の有意な促進及びIL-5産生の有意な抑制が認められた.

2005年，我们筛选了与L-选择素相互作用的糖链，这被认为是硫酸软骨素表现出Th1促进活性所必需的，并使用HPLC表征了它们的结构特征，通过NMR、MS等各种分析仪器发现了这一点，因此，我们于2006年对构成硫酸软骨素的分子基团进行了化学制备，并对活性表达所需的“糖链密码子”进行了详细研究。尺寸排阻色谱法分析源自鲸鱼软骨和牛气管软骨的硫酸软骨素。酸分离制备不同分子量的硫酸软骨素（鲸软骨来源硫酸软骨素：7,9,12,15,21,29kDa，牛气管软骨来源硫酸软骨素：6,7,9,13,15）、17、21、26、33 kDa）。使用水溶液获得不饱和二糖后，将不饱和二糖衍生化并使用高效液相色谱进行分析，结果表明，使用分级分离的硫酸软骨素和L-选择素之间的相互作用分析，维持了分级分离之前的二糖组成。等离子共振测量装置，我们发现21kDa软骨素我们发现硫酸Chin具有最高的亲和力，并且亲和力随着分子量的降低而降低。我们还评估了分级分离的硫酸软骨素对抗原致敏的小鼠脾细胞的免疫化学活性，显着促进IFN-γ产生并显着抑制IL。 -5 的产生以硫酸的分子量依赖性方式观察到。