発現にrpoZを必要とする放線菌の形態分化と二次代謝に関与する遺伝子群の解析

需要rpoZ表达的放线菌形态分化和次生代谢相关基因分析

• 批准号: 17780062
• 负责人: 春日 和
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Akita Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780062/
• 关键词: 応用微生物; 遺伝子; 抗生物質; 分化; rpoZ; 放線菌; 形態分化; 抗生物質生産

1 Streptomyces avermitilisの形態分化および物質生産に関与するrpozの影響昨年度までに構築したrpoZ置換プラスミドを、S.avermitilisのエバーメクチン(AW)高生産株K139とAVM非生産株SUKA1に導入した。得られた形質転換体から二回交差によりrpozがloxP-hph-loxPで置換されたrpoZ置換株を単離した。CreタンパクによりloxP間領域を欠失させたrpoZ欠失株の作製はまだ成功していない。これまでに、SUKA1由来のrpoZ置換株が灰色胞子形成を欠損したが気菌糸を形成したこと、K139由来のrpo2置換株がAVMの生産を欠損したことを明らかにしている。これら変異型がrpo2欠損のみによるものであるかは今後検討する予定である。2 Streptomyces kasugaensisの気菌糸形成に関与する遺伝子群の解析とrpoZとの関連S.kasugaensisの気菌糸形成がrpo2変異により欠損することに着目し、S.kasugaensisの気菌糸形成誘導遺伝子を単離・解析した。気菌糸誘導遺伝子amfRおよび誘導物質生合成遺伝子amfTについて、S.kasugaensisのゲノムDNAを鋳型として縮重PCRを行った。amfTの増幅に成功したため、その周辺9kb長のDNAをクローン化して塩基配列を決定した。amfTおよび誘導物質前駆体遺伝子amfS、ABCトランスポーター遺伝子orf3を見出した。これら遺伝子の発現を調べ、S.kasugaensisのrpoZ欠損株では野生株に比べて発現量が著しく減少したことを明らかにした。また、amfTS-orf3をrpoZ欠損株で強制発現させ、気菌糸形成の復帰を確認した。以上から,amfTS-orf3はS.kasugaensisの気菌糸形成に関与し、その発現がrpoZに依存していると考えられる。

1 rpoz对阿维链霉菌形态分化和物质生产的影响将去年构建的rpoZ替换质粒导入阿维链霉菌阿维菌素(AW)高产菌株K139和AVM非产菌株SUKA1中。从获得的转化体中，通过两次交叉分离出rpoz被替换为loxP-hph-loxP的rpoZ替换株。使用 Cre 蛋白删除 interloxP 区域的 rpoZ 删除菌株的创建尚未成功。到目前为止，我们已经证明源自 SUKA1 的 rpoZ 取代菌株在灰色孢子形成方面存在缺陷，但形成了气生菌丝，而源自 K139 的 rpo2 取代菌株在 AVM 生产方面存在缺陷。我们计划调查这些突变类型是否仅仅是由于 rpo2 缺陷所致。 2 春日链霉菌气生菌丝形成相关基因及其与rpoZ的关系分析针对rpo2突变导致春日链霉菌气生菌丝形成缺陷的事实，我们分离分离了春日链霉菌气生菌丝形成的诱导基因。分析了春日。以春日链霉菌基因组DNA为模板，对气生菌丝诱导基因amfR和诱导物生物合成基因amfT进行简并PCR。成功扩增amfT后，我们克隆了周围的9kb DNA并确定了其核苷酸序列。我们发现了 amfT、诱导剂前体基因 amfS 和 ABC 转运蛋白基因 orf3。我们研究了这些基因的表达，发现与野生型菌株相比，rpoZ 缺陷的 S. kasugaensis 菌株的表达水平显着降低。此外，我们在rpoZ缺陷菌株中强制表达amfTS-orf3，并证实了气生菌丝形成的恢复。这些结果表明amfTS-orf3参与春日沙门氏菌气生菌丝的形成，并且其表达依赖于rpoZ。