精子走化性における誘引物質の鞭毛運動制御機構の解明

阐明精子趋化过程中引诱剂鞭毛运动控制机制

基本信息

批准号：
16687003
负责人：
吉田学
金额：
$ 19.39万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

カタユウレイボヤを主な材料として、精子活性化・誘引物質(SAAF)がもたらす精子運動活性化と走化性反応の分子機構を調べるとともに、ヒト・マウス等の哺乳類精子が卵及び精漿由来成分にどの程度に運動調節を受けるか、基礎的な研究を行っている。1)SAAF受容体の同定:昨年に引き続きSAAF受容体の精製を行った。SAAFアフィニティカラムを作成し、精子細胞膜画分のタンパク質より精製を試みたところ、約300kDaのタンパク質がSAAFと相互作用することが判った。現在アミノ酸配列の同定を行っている。2)SAAFによる精子鞭毛運動調節機構の解析:運動中精子のイメージングを行う蛍光顕微鏡装置の開発を行い、LEDストロボ照明を用いて毎秒50コマ、1コマ1ミリ秒の速度でイメージングを行うことを可能とした。そして卵より精子誘引物質が精製、同定されているカタユウレイボヤにおいて、走化性時の精子鞭毛運動について詳細な運動解析と細胞内カルシウムイメージングを行い、鞭毛内のカルシウム濃度の一過的な上昇が鞭毛打の対称性を調節し走化性行動を引き起こすことを発見した。3)哺乳類における精子鞭毛運動調節機構の解析:マウスを用いて、精子運動に対する精嚢腺由来物質の阻害効果を研究している。昨年度我々が同定したマウス精子受精能破壊因子セメノクロチンによる精子の受精能阻害機構を調べるため、本年度はセメノクロチンの精子上の受容体を探索した。その結果、セメノクロチン受容体は脂質構成成分であるガングリオシドGMIであることを明らかとした。

以Ciona为主要材料，研究了精子激活/吸引物质（SAAF）引起的精子活力激活和趋化反应的分子机制，并研究了人类和小鼠等哺乳动物精子如何与卵子和精浆相互作用。我们正在对我们是否受到一定程度的运动控制进行基础研究。 1）SAAF受体的鉴定：继去年之后，我们继续纯化SAAF受体。当我们创建 SAAF 亲和柱并尝试从精子细胞膜组分中纯化蛋白质时，我们发现大约 300 kDa 的蛋白质与 SAAF 相互作用。我们目前正在鉴定氨基酸序列。 2）利用SAAF分析精子鞭毛运动的调节机制：我们开发了一种荧光显微镜装置来对活动的精子进行成像，并使用LED频闪照明以每秒50帧、每帧1毫秒的速度进行成像。在 Ciona 中，精子引诱剂已从卵中纯化并鉴定出来，我们对趋化过程中精子鞭毛运动进行了详细的运动分析和细胞内钙成像，他们发现它调节中风的对称性并诱导趋化行为。 3）哺乳动物精子鞭毛运动调控机制分析：我们正在利用小鼠研究精囊源性物质对精子运动的抑制作用。为了研究我们去年发现的小鼠精子生育力破坏因子精囊素抑制精子受精的机制，今年我们寻找精子上精囊素的受体。结果发现精囊素受体是脂质成分神经节苷脂GMI。