心臓特異的コンディショナルターゲティングによるRAMP2の病態生理学的意義の解明

通过心脏特异性条件靶向阐明 RAMP2 的病理生理学意义

基本信息

批准号：
11J10361
负责人：
吉沢隆浩
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

アドレノメデュリン(AM)は全身で産生される多機能ペプチドである。AMホモノックアウトマウス(AM-/-)では、心血管系の発生異常により胎生致死となる。AM受容体の活性や特異性はRAMPという膜タンパクが調節している。我々は、RAMPのサブアイソフォームの内、RAMP2ホモノックアウトマウスのみがAM-/-同様に胎生致死になる事を報告している。本研究では、薬剤誘導型心筋細胞特異的RAMP2ノックアウトマウス(C-RAMP2-/-)を独自に樹立し、従来胎生致死となるために不可能であった成体の心臓における詳細な解析を行った。前年度は、C-RAMP2-/-で心不全の自然発症を認め、さらに発症初期から心筋ミトコンドリアに異常を認める事を明らかにした。平成24年度は、C-RAMP2-/-における心不全発症メカニズムの検討と治療実験を実施した。経時的な遺伝子発現の変化をリアルタイムPCRにより検討したところ、C-RAMP2-/-の心臓ではミトコンドリア制御因子PGC-1αの遺伝子発現変動が、心不全関連因子の変動に先行して認められた。ウエスタンブロットでは、PGC-1の制御に関わることが報告されているCREBのリン酸化低下が認められた。C-RAMP2-/-におけるCREB制御機構を明らかとするために、AM-RAMP2系の下流シグナルを検討したところ、細胞内cAMPの減少や、AMの下流シグナル分子のリン酸化低下が認められた。また、フォルスコリン投与により細胞内cAMPを増加させたところ、C-RAMP2-/-の心不全に改善が認められた。同様にC-RAMP2-/-の初代培養心筋細胞にフォルスコリンを添加したところ、ミトコンドリア膜電位などに改善を認めた。以上の結果から、AM-RAMP2系は心筋ミトコンドリアの機能維持・制御を介して心臓の恒常性維持に重要であることが明らかとなった。

肾上腺髓质素 (AM) 是一种全身产生的多功能肽。在 AM 纯合基因敲除小鼠 (AM-/-) 中，由于心血管系统发育异常而导致胚胎死亡。 AM 受体的活性和特异性由称为 RAMP 的膜蛋白调节。我们报道了RAMP亚型中，只有RAMP2纯合基因敲除小鼠具有胚胎致死性，与AM-/-小鼠类似。在这项研究中，我们独立建立了药物诱导的心肌细胞特异性RAMP2敲除小鼠（C-RAMP2-/-），并对成年心脏进行了详细分析，这在以前由于胚胎致死性而无法实现。去年，我们在C-RAMP2-/-中发现了自发性心力衰竭的发病，并且在发病早期就发现了心肌线粒体的异常。 2012年度，我们研究了C-RAMP2-/-的心力衰竭发生机制，并进行了治疗实验。当使用实时 PCR 检查基因表达随时间的变化时，观察到线粒体调节剂 PGC-1α 基因表达的变化先于 C-RAMP2-/- 心脏中心力衰竭相关因子的变化。蛋白质印迹显示 CREB 磷酸化降低，据报道 CREB 参与 PGC-1 的调节。为了阐明C-RAMP2-/-中CREB的控制机制，我们检测了AM-RAMP2系统的下游信号，发现细胞内cAMP减少，AM下游信号分子磷酸化减少。此外，当通过施用毛喉素增加细胞内cAMP时，观察到C-RAMP2-/-的心力衰竭得到改善。同样，当将毛喉素添加到原代培养的 C-RAMP2-/- 心肌细胞中时，观察到线粒体膜电位的改善。上述结果表明AM-RAMP2系统通过维持和控制心脏线粒体的功能，对于维持心脏稳态具有重要意义。

项目成果

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会议论文数量（0）

专利数量（0）

アドレノメデュリンによる心臓ミトコンドリア保護作用

肾上腺髓质素对心脏线粒体的保护作用

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Koyama T;Yoshizawa T;et al;吉沢隆浩;吉沢隆浩
通讯作者：
吉沢隆浩

Adrenomedullin-RAMP2 system is essential for cardiac homeostasis

肾上腺髓质素-RAMP2 系统对于心脏稳态至关重要

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Yoshizawa;T. Sakurai;A. Kamiyoshi;Y. Shindo;H. Kawate;T. Koyama;R. Uetake;L. Yang;A. Yamauchi;M. Tanaka;K. Igarashi;H. Kawakami;H. Nakanishi;R. Taguchi;T. Nakanishi;T. Shindo
通讯作者：
T. Shindo

Induction of LYVE-1/stabilin-2-positive liver sinusoidal endothelial-like cells from embryoid bodies by modulation of adrenomedullin-RAMP2 signaling