CD82の血管内皮細胞における生理機能の解析

CD82在血管内皮细胞中的生理功能分析

基本信息

批准号：
22790369
负责人：
長尾香里
金额：
$ 2.58万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790369/
关键词：
CD82 HIF-2 血管内皮細胞

项目摘要

HIFは低酸素環境下で生体内に引き起こされる遺伝子発現を制御する転写因子である。血管内皮細胞にはHIF-1とHIF-2の2種類が存在しており、各々制御する遺伝子に違いがあることが知られている。HIF-2は血管の成熟化に重要な役割を果たしていることが示唆されているが、詳細は明らかではない。そこで血管内皮細胞においてHIF-2特異的に誘導される分子の検索を行い、CD82を同定した。CD82の血管内皮細胞における発現は報告があるが、転写制御についてはあまり報告がない。レポータージーンアッセイとChIPアッセイにより、CD82はイントロン1に存在するHREを介してHIF-2に転写制御されることが明らかとなった。HIF-2によるCD82の転写制御機構は新しい報告である。CD82の発現上昇が血管内皮細胞の挙動にどのような変化を及ぼすのか、細胞が受け取るシグナル伝達がCD82によって調節されているのか、CD82強制発現を行って検討した。CD82はテトラスパニンファミリーに属する分子であり、上皮細胞では増殖因子刺激によるシグナル伝達やインテグリンによる基質への接着、カドヘリンによる細胞間接着を調整しているとの報告がある。CD82強制発現した血管内皮細胞においてスクラッチアッセイを行ったところ細胞シートの移動の抑制が認められたことから、細胞増殖抑制、細胞間接着の強化、細胞-基質間接着強固の3つの可能性が考えられた。最初に細胞増殖について検肘したが、差は認められなかった。次に細胞間接着のない状態で、個々の細胞移動度についてタイムラプスイメージングを行った解析の結果、細胞間接着によらず個々の細胞運動自体が抑制されることが明らかになった。新生血管が構築されるまでの過程、すなわち血管新生の開始時から血管形成完了までの間の血管内皮細胞の動きは細胞膜上の分子と細胞外マトリクスとの相互作用によって調整されている。血管内皮細胞におけるCD82がその調節機能の一端を担っていることが予想される。今後は細胞-基質間接着の調節におけるCD82の関与と、CD82トランスジェニックマウスを用いたin vivoでの血管新生調節について検討を行いたい。

HIF是一种转录因子，可调节在低氧环境中体内引起的基因表达。血管内皮细胞HIF-1和HIF-2有两种类型，众所周知，调节它们的基因存在差异。尽管已建议HIF-2在血管成熟中发挥重要作用，但细节尚不清楚。因此，对在血管内皮细胞中特别诱导的分子进行了搜索以鉴定CD82。尽管已经报道了CD82在血管内皮细胞中的表达，但关于转录调控的报告并不多。记者基因和CHIP分析表明，CD82通过内含子1中的HRE在转录上调节HIF-2。HIF-2对CD82的转录控制机理是一份新报告。我们研究了CD82表达增加如何影响血管内皮细胞的行为，以及细胞收到的信号是否通过强行表达CD82的CD82调节。 CD82是一种属于四跨氨酰家族的分子，据报道，在上皮细胞中，它通过生长因子刺激来调节信号传导，整合素对底物的粘附以及钙粘蛋白的细胞间粘附。在具有CD82强迫表达的血管内皮细胞上进行了刮擦测定，并观察到细胞片迁移的抑制，从而可能有三种可能性：抑制细胞增殖，增强细胞细胞粘附和固化细胞 - 基底粘附。首先检查了细胞增殖，但未观察到差异。接下来，在没有细胞细胞粘附的情况下对单个细胞迁移率进行的延时成像分析表明，无论细胞细胞粘附如何，单个细胞迁移率本身都受到抑制。血管内皮细胞从新血管形成开始到血管生成完成的运动受细胞膜上分子与细胞外基质的相互作用的调节。预计血管内皮细胞中的CD82在其调节功能中起着作用。将来，我们希望研究CD82参与细胞基底粘附的调节，并使用CD82转基因小鼠在体内调节血管生成。