Th1/Th2細胞における皮膚ホーミングレセプター発現機序に関する研究

Th1/Th2细胞皮肤归巢受体表达机制研究

基本信息

批准号：
15790597
负责人：
高橋良
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

平成15年度の研究において,in vitroでTh1・Th2に分化させた細胞の,CLA及びケモカインレセプタのCCR4の発現と共に,E-セレクチンへの結合能(E-セレクチンリガンド,ESLの発現)について研究し,Th1・Th2細胞の分化に依存しないESLの発現について新たな知見を得たが,本年度はこの結果を元に,Th1あるいはTh2細胞ではないnon-polarized Th cellにおけるCCR4及びESLの発現が,Th1-rich及びTh2-richなサイトカイン環境下でどのように発現するのかを調べた結果,新たな知見を得た。1.non-polarized Th細胞をIL-12存在下で刺激した時,CLAの発現と同様にESLの持続的な発現を示したが,CCR4は検出できなかった。対照的に,IL-4存在下で刺激した場合,CLA発現は消失したがCCR4の発現が誘導され,ESLの発現は維持されていた。すなわち,Th1/Th2細胞を含め,non-polarized Th細胞自身の分化ではなく細胞周囲のサイトカイン環境によってESLやCCR4の発現がコントロールされていることを,本研究によってより確かにした。2.ESLの発現を制御する糖転移酵素はfucosyltransferase(FucT)VIIが重要な働きを担っているが,別の酵素であるFucT-IVもESLの発現を制御することがわかっている。ところが,どのように酵素が誘導されてESLの発現の制御を行っているのかはわかっていない。そこでFucT-VII及びFucT-IVを発現しているトランスフェクタントを樹立して実験を行った。両トランスフェクタントのESL及びCLAの発現をフローサイトメトリー測定し,さらにデジタルビデオ顕微鏡撮影装置で形態学的観察を行った結果,FucT-VIIトランスフェクタントはESLとCLAの両者を発現していたが,FucT-IVトランスフェクタントはCLAを発現せずESLのみ発現していた。この所見は,Th細胞をIL-12存在下で培養した場合はFucT-VIIトランスフェクタントと,また,Th細胞をIL-4存在下で培養した場合はFucT-IVトランスフェクタントの実験結果と同一の結果を示しており,大変興味深い実験結果を得ることができた。

在2003年的研究中，我们研究了体外分化为Th1和Th2的细胞中CLA和趋化因子受体CCR4的表达，以及它们与E-选择素（E-选择素配体的表达，ESL）结合的能力。关于ESL的表达与Th1和Th2细胞的分化无关的新知识。基于此结果，今年我们将使用非Th1或Th2细胞的非极化Th。通过研究 CCR4 和 ESL 在富含 Th1 和 Th2 细胞因子环境下的细胞中如何表达，获得了新的发现。 1.当IL-12存在下刺激非极化Th细胞时，它们表现出持续的ESL表达以及CLA表达，但无法检测到CCR4。相反，当在IL-4存在下刺激时，CLA表达消失，CCR4表达被诱导，并且ESL表达得以维持。换句话说，本研究进一步证实ESL和CCR4的表达并非受非极化Th细胞（包括Th1/Th2细胞）分化的控制，而是受细胞周围细胞因子环境的控制。 2.虽然岩藻糖基转移酶（FucT）VII在控制ESL的表达中发挥重要作用，但另一种酶FucT-IV也已知控制ESL的表达。然而，尚不清楚如何诱导该酶来控制 ESL 表达。因此，我们建立了表达FucT-VII和FucT-IV的转染子并进行了实验。通过流式细胞仪测定两种转染子中ESL和CLA的表达，并使用数字视频显微镜进行形态学观察，结果，FucT-VII转染子均表达ESL和CLA，而FucT-IV转染子不表达。 CLA，但只有 ESL。这一发现与在IL-12存在下培养Th细胞时使用FucT-VII转染子的实验以及在IL-4存在下培养Th细胞时使用FucT-IV转染子的实验一致。结果显示与之前相同的结果。结果，我们能够获得非常有趣的实验结果。