CD28ファミリー分子によるT細胞活性化調節の分子機構

CD28家族分子调控T细胞活化的分子机制

基本信息

批准号：
15790053
负责人：
原田陽介
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790053/
关键词：
T細胞補助シグナルシグナル伝達 CD28 NFκB

项目摘要

CD28 signalの特徴の一つとして、IL-2の産生増強があげられる。IL-2の転写は様々な転写因子がそのpromoter領域に結合することで調節されているが、なかでもNFκBはCD28のco-stimulationに対する依存性が高いことが知られている。近年、長らく謎であったTCR signalによるNFκB活性化のpathwayの解析が進み、PKC_θ,CARMA1,Bcl10といった分子が重要であることが明らかになってきた。しかし、CD28がこれらの分子にどのような影響をあたえるのか、またTCR signalとは違うCD28特有のシグナルが存在するのかといった疑問に対しての解答はまだほとんど出ていない。そこでBcl10がCD28 signalによるNFκBの活性化にどのような役割をはたしているのかを解析することにした。Jurkat細胞にBcl10を過剰発現させ、CD28刺激によるIL-2 promoterおよびNFAT, CD28RE, NFκB siteの活性化を測定した。Bcl10を過剰発現させるとCD28刺激によるCD28REおよびNFκB siteの活性化が著しく増強された。一方、NFAT siteの活性化にはほとんど影響がなかった。また、Bcl10による増強効果はPKCθの阻害剤の添加、またはPKCθのドミナントネガティブ体により強く阻害された。CD28 signalがBcl10分子に与える影響を調べるために、CD28 signalがBcl10のリン酸化及び細胞膜への移行を誘導するかを検討したところ、Bcl10分子はCD28刺激に伴い、リン酸化と細胞膜への移行が観察された。さらに、CARMA1を過剰発現させるとBcl10同様にCD28シグナルによるNF-κBの活性化を増強し、CARMA1のドミナントネガティブ体はBcl10によるNF-κBの活性化増強を阻害した。以上の結果は、PKCθ-CARMA1-Bcl10 pathwayがCD28依存性のNFκB活性化に非常に重要な役割を担っていることを示唆している。

CD28信号的特征之一是IL-2的产生增强。 IL-2 转录受到与其启动子区域结合的各种转录因子的调节，并且已知 NFκB 特别依赖于 CD28 共刺激。近年来，TCR信号激活NFκB的长期神秘途径的分析取得了进展，并且已经清楚PKC_θ、CARMA1和Bcl10等分子的重要性。然而，诸如CD28如何影响这些分子以及是否存在CD28特有的不同于TCR信号的信号等问题仍然鲜有答案。因此，我们决定分析Bcl10在CD28信号激活NFκB中的作用。我们在 Jurkat 细胞中过表达 Bcl10，并通过 CD28 刺激测量了 IL-2 启动子、NFAT、CD28RE 和 NFκB 位点的激活。 Bcl10 的过表达显着增强了 CD28 刺激的 CD28RE 和 NFκB 位点的激活。另一方面，对 NFAT 位点激活影响不大。此外，添加PKCθ抑制剂或显性失活形式的PKCθ会强烈抑制Bcl10的增强作用。为了研究CD28信号对Bcl10分子的影响，我们研究了CD28信号是否诱导Bcl10磷酸化并易位至细胞膜。我们发现，在CD28刺激下，Bcl10分子发生磷酸化并易位至细胞膜。此外，与Bcl10一样，CARMA1的过表达增强了CD28信号对NF-κB的激活，而CARMA1的显性失活形式抑制了Bcl10对NF-κB激活的增强。这些结果表明 PKCθ-CARMA1-Bcl10 通路在 CD28 依赖性 NFκB 激活中起着非常重要的作用。