遺伝子改変マウスを用いた消化器癌発生進展におけるRASAL1の機能解析

使用转基因小鼠进行RASAL1在胃肠道癌症发生和进展中的功能分析

基本信息

批准号：
22590678
负责人：
杉本貴史
金额：
$ 2.08万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22590678/
关键词：
消化器癌 RASシグナル遺伝子改変マウス RASGAP

项目摘要

RASAL1はRASの活性を負に制御するRASGAPであり、当科ではその発現低下によりRASが活性化された大腸癌、胃癌がかなりの頻度で存在することを示した。本研究ではRASAL1の消化器癌発生進展への関与のメカニズムを明らかにするため、RASAL1の組織特異的ノックアウトマウスを作製し、その表現型を解析することとした。まず、マウスRasal1のRasGAPドメインをコードするエクソン11から13までを条件的にノックアウトするマウス(Rasall flox)の樹立に成功した。現在Rasall floxマウスを全身でCreを発現するCAG-Creマウス、大腸特異的、膵特異的CreマウスであるCdx2-Cre,Ptfla-Creマウスと交配することにより、各組織特異的Rasal1ノックアウトマウスの作製を進めている。まだpreliminaryであるが全身でのRasal1ホモノックアウトが得られている。Cdx2-Cre;Rasal1^<flox/flox>マウスも得られており、今後表現型の解析を進める。また、Rasal1単独のノックアウトでは明らかな表現型が現れない場合でも、他の遺伝子改変マウスの表現型をRasal1ノックアウトが増強あるいは減弱させることも考えられるため、腸管にポリープを生じるAPCノックアウトマウスとの交配もすでに開始している。今後上記のマウスに加えて、b-catenin活性化型変異を条件的に発現するマウス(b-catenin(exon3)flox)やTGFbII型受容体の条件的ノックアウトマウス(TGFbR2flox)とも交配を進める予定である。

RASAL1是一种负调节RAS活性的RASGAP，在我们科室，我们已经证明，相当数量的结肠癌和胃癌由于RASAL1表达减少而激活了RAS。在本研究中，为了阐明RASAL1参与胃肠道癌症发生发展的机制，我们创建了RASAL1组织特异性敲除小鼠并分析了它们的表型。首先，我们成功建立了一种小鼠（Rasall flox），其中编码小鼠 Rasal1 的 RasGAP 结构域的外显子 11 至 13 被条件性敲除。目前，我们正在通过将 Rasall flox 小鼠与全身表达 Cre 的 CAG-Cre 小鼠以及结肠特异性和胰腺特异性 Cre 小鼠 Cdx2-Cre、Ptfla-Cre 小鼠杂交来创建针对每个组织的 Rasal1 敲除小鼠正在进行中。虽然还处于初步阶段，但已经获得了 Rasal1 全身纯合敲除。 Cdx2-Cre;Rasal1^<flox/flox>小鼠也已获得，后续将进行表型分析。此外，即使单独敲除Rasal1并不能产生明确的表型，Rasal1敲除可能会增强或减弱其他转基因小鼠的表型，因此与肠道中出现息肉的APC敲除小鼠的杂交已经开始。未来，除了上述小鼠外，我们还计划与条件性表达b-catenin激活突变的小鼠（b-catenin(exon3)flox）和TGFbII型受体条件性敲除小鼠（TGFbR2flox）进行杂交。