Nurr1相互作用分子から迫るカテコールアミン合成酵素発現機構の解明

从 Nurr1 相互作用分子中阐明儿茶酚胺合酶的表达机制

基本信息

批准号：
14780586
负责人：
鈴木崇弘
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology (2003)Fujita Health University (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780586/
关键词：
Tyrosine hydroxylase Nurr1 ATF-2 NGF MEK Tyrosine Hydroxylase

项目摘要

転写因子ATF-2は、Nurr1遺伝子発現調節領域に存在するcAMP応答配列(CRE)に結合することが報告されており、かつ神経の発達に重要であることが示唆されている。前年度の成果として、ATF-2は、チロシン水酸化酵素(TH)の遺伝子発現調節領域に存在するCREに作用して、THの発現誘導に関わることを示した。神経発達期に重要である神経成長因子(NGF)は、Nurr1の発現誘導とATF-2のリン酸化上昇の両方を引き起こすことから、本年度はNGFによるTHの発現誘導機構を解析した。PC12D細胞においてNGF刺激により誘導されるTH mRNA量の増大は、MEK阻害剤であるU0126で前処理することで抑制されたが、p38 MAPK、PI3K、およびPKAの阻害剤では抑制されなかった。また、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った結果、U0126は、NGFにより誘導されるTHプロモーター活性の上昇を抑制し、その濃度依存性はERK1/2リン酸化誘導の抑制と一致していた。野生型Rasおよび活性化型MEK1の一過性過剰発現によりTHプロモーター活性は上昇し、不活性化型Rasの過剰発現によりNGF刺激によるTHプロモーター活性の誘導は抑制された。さらに、NGFはTHプロモーターに存在するAP-1応答配列とcAMP応答配列(CRE)の両方に対してRas-MEK依存的な活性化を行っていた。以上の結果から、NGFによるTH発現誘導にはRas-MEK経路の活性化が必要であることが示され、この成果を論文として発表した。Ras-MEK経路は、ATF-2の転写活性を制御することが示唆されており、Ras-MEK経路によるATF-2およびNurr1の機能制御がTHの発現誘導に作用する可能性が考えられた。

据报道，转录因子 ATF-2 与 Nurr1 基因表达调控区中存在的 cAMP 反应元件 (CRE) 结合，并且被认为对神经发育很重要。去年的结果表明，ATF-2 通过作用于酪氨酸羟化酶 (TH) 基因表达调控区中的 CRE 来参与 TH 表达的诱导。在神经发育过程中很重要的神经生长因子（NGF）会诱导Nurr1表达和ATF-2磷酸化，因此今年我们分析了NGF诱导TH表达的机制。 PC12D 细胞中 NGF 刺激诱导的 TH mRNA 水平增加受到 MEK 抑制剂 U0126 预处理的抑制，但不受 p38 MAPK、PI3K 和 PKA 抑制剂的抑制。此外，荧光素酶报告基因检测结果显示，U0126抑制了NGF诱导的TH启动子活性的增加，其浓度依赖性与抑制ERK1/2磷酸化诱导一致。野生型 Ras 和激活的 MEK1 的瞬时过表达增加了 TH 启动子活性，而失活 Ras 的过表达则抑制了 NGF 刺激对 TH 启动子活性的诱导。此外，NGF 以 Ras-MEK 依赖性方式激活 TH 启动子中存在的 AP-1 反应元件和 cAMP 反应元件 (CRE)。上述结果表明，NGF诱导TH表达需要激活Ras-MEK通路，该结果发表在论文中。 Ras-MEK途径被认为控制ATF-2的转录活性，并且认为Ras-MEK途径对ATF-2和Nurr1的功能调节可能作用于TH表达的诱导。