ラミンA/C遺伝子変異による拡張型心筋症発症機序の検討

核纤层蛋白A/C基因突变引起的扩张型心肌病发病机制的探讨

基本信息

批准号：
14770340
负责人：
岡直樹
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770340/
关键词：
ラミンA C 拡張型心筋症心筋細胞遺伝子異常アポトーシス遺伝子変異

项目摘要

Nuclear laminaの構成蛋白であるラミンA/Cの遺伝子異常は、家族性拡張型心筋症(DCM)を来す。しかしながらラミンA/C遺伝子変異がどのようにDCMを来すのかは未だ不明であり、本検討はその機序の解明を目的としている。昨年度、野生型ラミンA/C cDNAをクローニングし、目的な変異を挿入した。これらのコンストラクトは、ほ乳類発現ベクターに挿入した。今年度は、心筋細胞に野生型ラミンA/Cと変異ラミンA/Cを発現させ、まず細胞生存率に与える影響を検討した。野生型ラミンA/Cに比し、変異ラミンA/C発現細胞では生存率の低下がみられた。TUNEL染色による評価では、野生型に比し変異ラミンA/C発現細胞では有意にTUNEL陽性細胞が増加していた。また、DNA ladderingも変異ラミンA/C発現により出現しており、変異ラミンA/Cは主としてアポトーシスにより、心筋細胞死を誘導する可能性が示唆された。また、preliminaryな結果であるがfluo-3 AMを用いて細胞内Ca^<2+>を測定すると野生型に比し、変異ラミンA/C発現細胞ではCa^<2+>スパークの振幅が減少していることがわかった。これらの結果は、ラミンA/C遺伝子異常は心筋収縮を直接減弱させると共に、心筋細胞死誘導することによりDCMを来す可能性を示唆している。今後、変異ラミンA/Cの過剰発現マウスの作成に着手する予定である。

核纤层蛋白 A/C（核纤层的组成蛋白）的遗传异常会导致家族性扩张型心肌病 (DCM)。然而，目前尚不清楚核纤层蛋白A/C基因突变如何导致DCM，本研究旨在阐明其机制。去年，我们克隆了野生型核纤层蛋白 A/C cDNA 并插入了所需的突变。这些构建体被插入哺乳动物表达载体中。今年，我们在心肌细胞中表达了野生型核纤层蛋白 A/C 和突变型核纤层蛋白 A/C，并首先检查了它们对细胞存活的影响。与野生型核纤层蛋白A/C相比，表达突变核纤层蛋白A/C的细胞的存活率降低。通过TUNEL染色评估，与野生型相比，表达突变核纤层蛋白A/C的细胞中TUNEL阳性细胞的数量显着增加。此外，由于突变核纤层蛋白A/C的表达也出现了DNA梯状效应，表明突变核纤层蛋白A/C可能主要通过细胞凋亡诱导心肌细胞死亡。此外，虽然这是初步结果，但当使用fluo-3 AM测量细胞内Ca ^ 2+ 时，与野生型相比，在表达突变核纤层蛋白A/C的细胞中Ca ^ 2+ 火花的幅度增加发现细胞正在减少。这些结果表明核纤层蛋白A/C基因异常可能直接减弱心肌收缩并通过诱导心肌细胞死亡而导致DCM。未来，我们计划开始培育过度表达突变核纤层蛋白 A/C 的小鼠。