多種哺乳類のAh受容体遺伝子を用いたダイオキシン類の新しい評価法

使用来自不同哺乳动物物种的 Ah 受体基因评估二恶英的新方法

• 批准号: 14760209
• 负责人: 大迫 誠一郎
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute for Environmental Studies
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760209/
• 关键词: AhR; Reporter Assay; Bench Mark Dose; Reporter assay

TCDDによる半数致死量(LD_<50>)は動物種ごとに大きく異なるが、これがAhRの潜在的転写能に依存するのか検討するため、数種の哺乳類AhRを同一のレポータージーンアッセイ上で試験し、ベンチマークドーズ(AhR-BMD)を測定した。まず、CHO細胞を用いた系(レポーター:ヒトCYP1A1遺伝子5'上流1500bp)では、感受性の最も低いとされるハムスターではどの用量でも誘導性は見られなず、感受性の著しく異なるとされるマウスの2系統、C57BL/6JおよびDBA/2さらにウサギの3点でBMDは報告されているLD_<50>と相関を示した。しかし、最も感受性の高いモルモットでは776μMと高値であった。また、HeLa細胞を用いた系(レポーター:合成4xXRE-tk)では、AhR-BMDにおいて、ラット>DBA/2マウス>ハムスター>ウサギ>ヒト>モルモット>C57BL/6Jマウスの順に感受性が高く、AhRの潜在的転写活性能と消耗症候群によるLD_<50>との相関性は取れないことが判明した。一方、上記の解析はリガンド非添加群の発現レベル(BA)を基準にしたものだが、このBAはCHP細胞で低BMDを示すDBA/2マウス、ウサギ、モルモット、ハムスター、ラット、ヒトにおいてはすでにC57BL/6Jマウスの最大誘導活性と同一レベルであった。このことはCYP1A1遺伝子の誘導にこれらのAhR分子はリガンド非存在化でも活性を保持していることを示している。C57BL/6Jマウス以外のAhRには共通するC-末端側のペプチト構造がある。そこでこの領域を欠損したDBA/2マウスの変異AhRを用いて同様の実験を行ったところ、BAの低下を示すことが明らかとなった。これはこの領域に、BAレベルを規定する調節機能があることを示している。

TCDD 诱导的半致死剂量 (LD_<50>) 在动物物种之间差异很大，但为了检查这是否取决于 AhR 的潜在转录能力，我们在相同的报告基因检测中测试了几种哺乳动物 AhR。测量了AhR-BMD)。首先，在使用 CHO 细胞的系统中（报告基因：人类 CYP1A1 基因 5' 上游 1500 bp），在仓鼠（据说敏感性最低）和小鼠（据说敏感性最低）中，任何剂量均未观察到诱导作用。两种菌株C57BL/6J和DBA/2的BMD具有显着不同的敏感性，并且三只兔子表现出与报道的LD_<50>相关。然而，最敏感的豚鼠的浓度高达 776 μM。此外，在使用HeLa细胞的系统中（报告者：合成4xXRE-tk），AhR-BMD的敏感性最高的顺序为大鼠>DBA/2小鼠>仓鼠>兔>人>豚鼠>C57BL/6J小鼠结果发现，由于消耗综合征，潜在转录活性与LD_<50>之间没有相关性。另一方面，上述分析是基于未添加配体组中的表达水平（BA），但这种BA已经在DBA/2小鼠、兔子、豚鼠、仓鼠、大鼠和人类中发现，其在 CHP 细胞中表现出低 BMD 水平与 C57BL/6J 小鼠的最大诱导活性相同。这表明即使在没有配体的情况下，这些 AhR 分子仍保留其诱导 CYP1A1 基因的活性。除 C57BL/6J 小鼠外，AhR 具有共同的 C 端肽结构。因此，当使用缺乏该区域的 DBA/2 小鼠的突变体 AhR 进行类似的实验时，发现它们表现出 BA 的减少。这表明该区域具有调节BA水平的调节功能。

项目成果

Exposure of mouse preimplantation embryos to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) alters the methylation status of imprinted genes H19 and Igf2.

小鼠植入前胚胎暴露于 2,3,7,8-四氯二苯并二恶英 (TCDD) 会改变印记基因 H19 和 Igf2 的甲基化状态。

• 发表时间: 2004
• 作者: Wu Q.; Ohsako S.; Ishimura R.; Suzuki JS.; Tohyama C.
• 通讯作者: Tohyama C.

Alterations of gene expression in adult male rat testis and pituitary shortly after subacute administration of the antiandrogen flutamide.

亚急性施用抗雄激素氟他胺后不久，成年雄性大鼠睾丸和垂体的基因表达发生变化。

• DOI: 10.1262/jrd.49.275
• 发表时间: 2003-08-01
• 期刊: The Journal of reproduction and development
• 作者: S. Ohsako;K. Kubota;Shuichi Kurosawa;K. Takeda;W. Qing;R. Ishimura;C. Tohyama
• 通讯作者: C. Tohyama

Effects of vinclozolin administration on sperm production and testosterone biosynthetic pathway in adult male rat.

乙烯菌核利林对成年雄性大鼠精子产生和睾酮生物合成途径的影响。

• DOI: 10.1262/jrd.49.403
• 发表时间: 2003-10-01
• 期刊: The Journal of reproduction and development
• 作者: K. Kubota;S. Ohsako;Shuichi Kurosawa;K. Takeda;W. Qing;M. Sakaue;Takashige Kawakami;R. Ishimura;C. Tohyama
• 通讯作者: C. Tohyama

Aryl-hydrocarbon receptor mediated down-regulation of cytochrome P450 side chain cleavage enzyme expression in the adult male mice testis.

芳基烃受体介导成年雄性小鼠睾丸中细胞色素 P450 侧链裂解酶表达的下调。

• 发表时间: 2004
• 作者: FUkuzawa H.N.; Ohsako S.; Kakaue M.; Baba T.; Tohyama C.
• 通讯作者: Tohyama C.

Comparative uterine gene expression analysis after dioxin and estradiol administration.

二恶英和雌二醇给药后比较子宫基因表达分析。

• 发表时间: 2004
• 作者: Watanabe H.; Suzuki1 A.; Goto M.; Ohsako S.; Tohyama C.; H;a H.; Iguchi1 T.
• 通讯作者: Iguchi1 T.