癌抑制遺伝子p27^<Kip1>導入による口腔癌遺伝子治療の可能性に関する研究

导入抑癌基因p27^<Kip1>进行口腔癌基因治疗的可能性研究

基本信息

批准号：
14771003
负责人：
佐藤淳
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771003/
关键词：
p27^<Kip1>口腔癌遺伝子治療細胞周期

项目摘要

p27蛋白の発現低下は、口腔癌も含め、多くの悪性腫瘍で高頻度にみられ、その発現低下は、過剰な分解によることが明らかとなっている。そこで、本研究では、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株HSC3細胞をヌードマウスの皮下に移植し形成された腫瘍に対して、野生型p27^<Kip1>と変異型p27^<Kip1>遺伝子導入を試みた。変異型p27^<Kip1>遺伝子は、187番目のセリン残基をアラニンに置換したもので、ユビキチン化による分解をうけない。HSC3細胞株を皮下に移植して2ヶ月後に遺伝子銃(Gene Gun ; Bio-rad社製)を使用して金粒子にそれぞれの遺伝子を付着させ、形成された腫瘍の表層から遺伝子導入をおこなった。肉眼的な観察では、明らかな腫瘍の壊死や腫瘍の大きさの変化は観察されなかった。腫瘍をホルマリン固定しHE染色標本で観察すると、腫瘍の大きさが2mm以下の小さな腫瘍は、腫瘍中央部分が角化壊死に陥っており、p27^<Kip1>遺伝子導入による影響は明らかではなかった。しかしながら、腫瘍の大きさが5mm以上となった腫瘍においては、遺伝子導入を行わないコントロール群の腫瘍では癌細胞は角化壊死に陥らず充実性に増殖していたのに対して、野生型p27^<Kip1>や変異型p27^<Kip1>の遺伝子導入を行った群では、腫瘍細胞の角化壊死が広範囲にわたって観察された。これらの標本を用いてp27^<Kip1>の免疫組織化学的検索を行うと、遺伝子導入を行わないコントロール群の癌細胞ではp27蛋白発現が低かったのに対して、野生型p27^<Kip1>や変異型p27^<Kip1>遺伝子導入を行った群の癌細胞では高い発現を示し、遺伝子が導入されていることが確認された。以上の結果から、野生型p27^<Kip1>ならびに変異型p27^<Kip1>遺伝子導入は癌細胞を壊死させることが明らかとなり、遺伝子治療への応用の可能性が示唆された。

p27蛋白表达降低在包括口腔癌在内的许多恶性肿瘤中经常观察到，并且已揭示这种表达降低是由于过度降解所致。因此，在本研究中，我们尝试将野生型p27^<Kip1>和突变型p27^<Kip1>基因导入到裸鼠Ta皮下移植的人口腔鳞状细胞癌细胞系HSC3形成的肿瘤中。突变体 p27^<Kip1> 基因的第 187 个丝氨酸残基被丙氨酸取代，并且不会被泛素化降解。皮下移植HSC3细胞系两个月后，使用基因枪(Bio-rad制造)将每个基因附着到金颗粒上，并从形成的肿瘤的表层引入基因。肉眼观察未见明显肿瘤坏死或肿瘤大小变化。将肿瘤固定在福尔马林中，用HE染色标本观察，发现2mm以下的小肿瘤，肿瘤中央部分有角化坏死，p27^<Kip1>基因导入的效果不清楚。然而，在大于5mm的肿瘤中，未进行基因转移的对照组的癌细胞并未发生角化坏死，并且增殖牢固，而野生型p27^<Kip1>或突变型p27^<Kip1>基因被转移的组中的癌细胞没有发生角化坏死，并且增殖牢固，而野生型p27^<Kip1>或突变型p27^<Kip1>基因的组中的癌细胞没有发生角化坏死，并且增殖牢固。据介绍，在大范围内观察到肿瘤细胞角化坏死。使用这些标本对p27^<Kip1>进行免疫组织化学搜索发现，在未导入基因的对照组癌细胞中p27蛋白表达较低，而突变p27^<Kip1>的野生型p27^<Kip1>组癌细胞中p27蛋白表达较低。导入的Kip1>基因显示出高表达，证实了该基因已被导入。上述结果表明，野生型p27^<Kip1>和突变型p27^<Kip1>基因导入引起癌细胞坏死，提示了应用于基因治疗的可能性。