無血清線維芽細胞培養方法の確立

无血清成纤维细胞培养方法的建立

基本信息

批准号：
21659410
负责人：
寺師浩人
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、正常線維芽細胞の無血清条件下における培養方法の確立を目的としている。生体内において、線維芽細胞は増殖をほぼ止めた状態でコラーゲンを産生していることを考慮すると、培養条件においても増殖せず生存し続け、かつ機能している(コラーゲンを産生している)ことが重要と考えている。前年度において、DMEM培地と新しい線維芽細胞用培地であるHFDM-1培地における細胞増殖率と生存率を求めたところ、前者が培養14日目でほぼ死滅するのに対して、後者では35日目まで生存が可能であった。また、ELISAによる線維芽細胞のコラーゲン産生を測定では、前者が細胞のコラーゲン産生能がないのに対して、後者では、培養線維芽細胞がコラーゲンを産生していることが確認された。そこで、今年度においては、コラーゲンを産生しながら長期培養を可能とする培地条件を探求するべく、HFDM-1培地に必須脂肪酸とパルミチン酸添加の増殖率と生存期間延長効果をみて、加えて細胞膜脂肪酸解析を同時に行うこととした。その結果、最も生存率が高く、細胞膜の脂肪酸組成が正常の線維芽細胞に近い培地条件は、パルミチン酸、リノール酸、EPAを添加した群であることが判明した。現時点においては長期培養方法の確立には至らないが、短期無血清培養方法として今後の研究に役立てたい。

这项研究旨在建立一种在无血清条件下培养正常成纤维细胞的方法。考虑到体内成纤维细胞几乎没有扩散产生胶原蛋白，因此重要的是不要在培养条件下生长并继续生存和运作（产生胶原蛋白）。在上一年，确定了DMEM培养基和新成纤维细胞培养基的细胞生长速率和生存率，而前者几乎在培养的第14天死亡，但后者能够生存到第35天。此外，在测量ELISA成纤维细胞中的胶原蛋白产生时，证实前者没有产生胶原蛋白的能力，而后者培养的成纤维细胞产生胶原蛋白。因此，在这个财政年度，为了探索在产生胶原蛋白时允许长期培养的媒介条件，我们决定观察到将必需脂肪酸和棕榈酸盐添加到HFDM-1培养基中的生长速率和效果，并进一步研究细胞膜脂肪酸分析。结果，发现在细胞膜中具有正常脂肪酸组成的培养基且接近成纤维细胞的培养基条件是添加棕榈酸，亚油酸和EPA的组。在这一点上，我们无法建立一种长期的文化方法，但是我们希望将其用作未来研究的短期无血清培养方法。