消化器外科領域における自己生体素材を用いた再生医療の開発

自体生物材料再生医学在胃肠外科领域的发展

• 批准号: 21659301
• 负责人: 高橋 秀和
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659301/
• 关键词: 自己生体材料; 消化器外科領域; 脂肪由来幹細胞

成体由来の幹細胞のうち脂肪由来幹細胞(Adipose Derived Stem Cells;ADSC)は比較的採取が容易で魅力的である。近年では多分化能、血管新生効果などが報告され、すでに肝・腎などの再生、心筋梗塞の治療、形成外科領域などで応用されているが、消化器外科手術領域ではまだ報告がない。消化器外科手術領域における感染性合併症には、死腔が原因と考えられるものは少なからず存在し、死腔が原因であるがゆえに治療に難渋する症例も多い、今回、腹腔内の死腔をマウスモデルで作成し、脂肪による充填を行い、組織構築における脂肪由来幹細胞の効果を検討した。C57BL/6Jマウスのソケイ部の反下脂肪を摘出しコラゲナーゼによる処理にてADSCを採取し、10日間培養した。フローサイトメトリーにて血管固有のマーカーであるCD31の発現を確認した。10週齢のオスのC57BL/6Jマウスに対し、精巣周囲の脂肪組織を摘出し、死腔モデルとした。摘出した脂肪片を死腔に充填し、PBSに浮遊させた1×10^6個のADSCを腹腔内投与する群(ADSC群)と、PBSのみ腹腔内投与する群(PBS群)を比較検討した。移植後3,7,14,21日目にマウスを犠死させ,下記の検討を行った。(1)移植片生着重量,(2)H&E染色による充填組織像,(3)CD31による免疫染色による血管密度評価,(4)摘出組織より抽出したtotal RNAの定量PCRによる血管新生因子VEGF。フローサイトメトリーにおいて、脂肪由来幹細胞にCD31陽性細胞が約7%に存在した。充填物重量は3、7日目では両群間に有意差を認めなかったか、14,21日目ではADSC群において有意に死填物重量が大きかった。またH&E染色においてPBS群は出血梗塞単を多数認めた。CD31抗体を用いた免疫組織染色において、400倍視野におけるCD31陽性細胞数を計測すると、3,7,14日目においてADSC群か有意に多かった。移植片より抽出したtotal RNAを用いたPCRでは血管新生因子であるVEGFは3、7日目において、ADSC群において有意に多かった。以上より腹腔囚における遊離脂肪片生着に対してADSCの共移植は有効な手段であると考えられた。

在成人衍生的干细胞中，脂肪来源的干细胞（ADSC）相对易于收集和吸引人。近年来，据报道，它已应用于肝脏和肾脏，心肌梗塞和整形手术领域，但尚未在胃肠道手术领域进行报道。消化系统手术区中有很多传染性并发​​症被认为是由死腔引起的，许多病例很难治疗，因为死腔是由死腔引起的。在本文中，我们在腹腔中创建了一个死腔的小鼠模型，充满了脂肪，并检查了脂肪衍生的干细胞在组织构建中的影响。去除了C57BL/6J小鼠的社会生物分析部分的抗取代脂肪，并通过用胶原酶处理收集ADSC并培养10天。通过流式细胞术证实了CD31（血管特异性标记）的表达。从10周龄的雄性C57BL/6J小鼠中去除睾丸周围的脂肪组织，并用作死亡腔模型。我们比较并检查了组（ADSC组），其中将1×10^6的ADSC与腹膜内（ADSC组）进行给药，并将切除的脂肪块填充到死腔中并悬浮在PBS中，而仅对腹膜内施用PBS的组（PBS组）。植入后第3、7、14和21天处死小鼠，并进行了以下调查。 （1）移植植入的重量，（2）用H＆E染色填充的组织学图像，（3）用CD31进行免疫染色的血管密度评估，以及（4）通过从切除组织中提取的总RNA的定量PCR进行的（4）血管生成因子VEGF。在流式细胞仪中，CD31阳性细胞存在于大约7％的脂肪衍生的干细胞中。在第3和第7天，两组之间的填充权重没有显着差异，在第14和21天，ADSC组的死亡包重明显更大。此外，在H＆E染色中，在PBS组中观察到许多出血梗死的病例。当使用CD31抗体在免疫组织化学染色中测量400倍视场中CD31阳性细胞的数量时，在第3、7和14天，ADSC组中的CCR明显更高。使用从植入物中提取的总RNA在第3和第7天的ADSC中，使用植入物的总RNA在ADSC中的自由vegf均显着更高。腹腔中的脂肪内膜结构。