高内皮細静脈特異的ヘパラン硫酸欠損マウスを用いたリンパ球ホーミングに関する研究

高内皮微静脉特异性硫酸乙酰肝素缺陷小鼠淋巴细胞归巢的研究

基本信息

批准号：
10J10756
负责人：
平川城太朗
金额：
$ 0.45万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、リンパ球ホーミングにおけるヘパラン硫酸の機能について解析することを目的とする。リンパ球ホーミングとは、リンパ球が血管系と二次リンパ組織間を絶えず循環して異物の侵入を監視し、免疫応答を調節するものである。これまでに、リンパ球ホーミングにはリンパ球は二次リンパ組織内の高内皮細静脈上と呼ばれる特殊な血管に接着することが知られている。さらに高内皮細静脈はリンパ球がリンパ組織へと遊走する際に入り口として機能する特殊な血管である。また、リンパ球ホーミングには高内皮細静脈上のヘパラン硫酸に結合する遊走化因子ケモカインが重要な役割を果たしていると考えられているが、in vivoにおけるその機能については報告されていない。ヘパラン硫酸は生体内で多様な機能を担っているため、全身性に遺伝子欠損されると胎生致死になることが知られる。そこで本研究では、高内皮細静脈特異的にヘパラン硫酸を欠損するコンディショナルノックアウトマウスを作製しリンパ球ホーミングにおけるヘパラン硫酸の機能について解析を行った。まず始めに高内皮細静脈特異的に組替え酵素Creリコンビナーゼ(Kawashima et al.J. Immunol.182:5461)を発現するトランスジェニックマウスとヘパラン硫酸生合成酵素EXT-1 Flox/Floxマウスと掛合わせ、高内皮細静脈特異的にヘパラン硫酸を欠損するマウスを作製した。作製したマウス及び同腹仔から二次リンパ組織を摘出し、高内皮細静脈特異的な抗体MECA-79及び、抗ヘパラン硫酸抗体10E4を用いて免疫組織染色を行ったところ、高内皮細静脈特異的なヘパラン硫酸の欠損が確認された。リンパ組織の大きさやB細胞及びT細胞局在や、リンパ組織の形態に違いは見られないことを確認した。

在这项研究中，目的是分析乙酰硫酸在淋巴细胞寄养中的功能。淋巴球的归位是一种淋巴细胞，不断在血管和继发性淋巴组织之间循环，监测异物的侵袭并调节免疫反应。迄今为止，已知淋巴细胞具有淋巴细胞的粘合剂，可对高chopolytoprozen静脉的继发性淋巴组织中的特殊血管粘合。此外，高英寸的皮肤静脉是一种特殊的血管，当淋巴细胞发挥淋巴组织时起着入口的作用。此外，据信，与静脉静脉过度静脉静脉相结合的淋巴细胞起着重要作用，但尚未报道体内功能。乙酰肝素在活体中是一种多样的功能，因此已知，如果基因缺乏全身性质的基因，则已知。因此，在这项研究中，有条件的基因敲除小鼠缺陷肝素硫酸是专门针对高内皮静脉的，并分析了肝素硫酸在淋巴球饲养中的功能。首先，一种表达高英寸皮肤的转基因小鼠和表达酶Cre ricombinase（Kawashima et al.J.182：5461）和硫酸乙酰肝素合成酶Ext-1 flox/flox flox/flox小鼠的特殊杂化静脉。一种专门在内皮静脉中专门在内皮静脉中缺陷的小鼠。从产生的小鼠和相同的腹部中去除次级淋巴组织，并使用高内皮静脉MECA-79进行免疫组织染色，并确认乙帕拉硫酸乙二醇甲酸酯的缺陷。已经证实，淋巴组织，B细胞和T细胞的大小与淋巴组织的形式之间没有差异。