MGL1による腸内共生細菌の認識を通した免疫・炎症応答の軽減機構の解明

阐明 MGL1 通过识别肠道共生细菌减少免疫和炎症反应的机制

• 批准号: 10J10365
• 负责人: 藏品 良祐
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10365/
• 关键词: MGL1; 大腸マクロファージ; 抗炎症性サイトカイン; hemITAM; 共生細菌; 乳酸菌; Syk; ERK; Lectin; MGL1,MGL2; 大腸炎; Interleukin 10; 腸内共生細菌

Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS)により大腸炎を誘導したマウスの腸管膜リンパ節から単離した腸内共生細菌の一つであるStreptococcusから、5Mグアニジン塩酸で処理することにより、MGL1結合性の分子を含む抽出物を得ることに成功した。さらに、この抽出物から、インゲン豆レクチンであるPHA-L4-アガロースビーズを用いて免疫沈降させた結果、MGL1結合性の分子を吸着させることが可能になった。現在、MGL1結合性の分子をSDS-PAGEにて展開し、ゲルの切り出しを行って質量分析法により解析している。野生型マウスの腸管におけるMGL1を発現している固有層マグロファージと大腸に浸潤した腸内共生細菌のStreptococcusとが直接認識することにより、抗炎症サイトカインであるInterieukin 10(IL-10)の遺伝子発現誘導が認められ、hemITAMの下流に存在すると知られているCARD9を経由することを明らかとした。そこで、私は、菌体によるMGL1を介するシグナルがhemITAMと会合するSpleen tyrosine kinase(Syk)を活性化するか否か、IL-10の発現誘導におけるSykの役割を検討した。さらに、転写因子であるNF-κB経路やMAPKs経路のp38には影響を及ぼさず、MAPKs経路のERKのみを活性化することを明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。

我们成功地获得了含有MGL1结合分子的提取物，通过处理链球菌，链球菌是从小鼠的肠膜淋巴结中分离出的肠道共生细菌之一，这些细菌通过硫酸葡萄糖硫酸盐盐（DSS）诱导了结肠炎的小鼠。此外，提取物使用pha-l4-琼脂糖珠，肾豆凝集素进行免疫沉淀，因此，可以吸附MGL1结合分子。当前，使用SDS-PAGE开发MGL1结合分子，通过质谱法切除和分析凝胶。 Direct recognition of lamellar propria tuna propria expressing MGL1 in the intestinal tract of wild-type mice and Streptococcus, an infiltrating intestinal symbiotic bacteria, infiltrating the large intestine, revealed that gene expression induction of the anti-inflammatory cytokine Interieukin 10 (IL-10), was observed, revealing that it passes through CARD9, which is known位于赫米塔姆的下游。因此，我研究了MGL1介导的信号是否激活脾酪氨酸激酶（SYK），其中Hemitam与脾酪氨酸激酶（SYK）相关联，以及SYK在诱导IL-10表达中的作用。此外，据透露，它对MAPKS途径的转录因子，NF-κB途径或p38没有影响，仅激活MAPKS途径的ERK，证实MGL1是第一个信号，从而产生了非常重要的结果。到目前为止，我一直在进行IL-10的表达分析，该IL-10专注于从诱发炎症的小鼠的肠道中分离出的肠道共生细菌。我们已经研究了与MGL1的结合与IL-10在称为益生菌的乳酸细菌中的表达诱导活性之间是否存在相关性。据透露，表现出与MGL1结合的L. casei，L。Gasseri和L. delbrueckii brugaricus诱导了结肠巨噬细胞中IL-10的表达。在源自MGL1-KO小鼠的结肠巨噬细胞中未观察到这种IL-10表达的诱导。从上面可以看出，不仅从小鼠肠道中分离出的MGL1结合菌种细菌，而且具有MGL1结合特性的益生菌还具有在大型肠道巨噬细胞中诱导IL-10的表达的活性。显然，这一结果证实了MGL1是第一个发送信号的人，并且非常有意义。到目前为止，我一直在进行IL-10的表达分析，该IL-10专注于从诱发炎症的小鼠的肠道中分离出的肠道共生细菌。我们已经研究了与MGL1的结合与IL-10在称为益生菌的乳酸细菌中的表达诱导活性之间是否存在相关性。据透露，表现出与MGL1结合的L. casei，L。Gasseri和L. delbrueckii brugaricus诱导了结肠巨噬细胞中IL-10的表达。在源自MGL1-KO小鼠的结肠巨噬细胞中未观察到这种IL-10表达的诱导。从上面可以看出，不仅从小鼠肠道中分离出的MGL1结合菌种细菌，而且具有MGL1结合特性的益生菌还具有在大型肠道巨噬细胞中诱导IL-10的表达的活性。

项目成果

腸管マクロファージにおけるC型レクチンMGL1/CD301aによる共生細菌の認識を通してのIL-10の発現誘導機構

肠道巨噬细胞中C型凝集素MGL1/CD301a识别共生菌诱导IL-10表达的机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Kiyomi Sasaki;S.M.Abdur Rahman;Norihiro Sato;Satoshi Obika;Takeshi Imanishi;Hidetaka Torigoe;佐藤憲大・片山拓馬・佐々木澄美・鳥越秀峰;山本剛史・斯波真理子・和田俊輔・生川径祐・鳥越秀峰・佐々木澄美・山岡哲二・今西武・小比賀聡;藏品良祐
• 通讯作者: 藏品良祐