LIMキナーゼ遺伝子の心臓発生過程における機能的役割の解析

LIM激酶基因在心脏发育过程中的功能作用分析

• 批准号: 13770348
• 负责人: 高橋 知之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: 若手研究(B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770348/
• 关键词: LIMキナーゼ; 心臓; サルコメア; アクチン細胞骨格; 分化

<研究の目的>近年、発生工学的手法の発展により、心筋細胞の発生・分化を惹起する増殖因子や転写因子の機能的役割の解析が急速に進んでいるが、サルコメアをはじめとする心筋細胞特異的な分化形態形成メカニズムについては未だ未解明の部分がほとんどである。本研究ではアクチン細胞骨格を制御するLIMキナーゼ(LIMKs)の心臓・心筋細胞の発生・分化過程における機能的役割を解析する事により、心筋細胞の分化形態であるサルコメア形成過程を中心に心臓の発生・分化機構を解明する事が目的である。<研究実績の概要>1.心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系の確立を行い、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入による遺伝子機能解析の可能性を検討した。2.免疫プロットやRT-PCRにより、心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系におけるLIMKsの発現解析を行った。3.野生型LIMKsならびに変異型LIMKsの発現アデノウイルスベクターの作製を行った。さらに変異型LIMKsの強制発現により、ES細胞の心筋分化(サルコメア形成)に及ぼす影響を検討した。4.種々の変異型LIMKs遺伝子導入により、LIMKsの成熟心筋細胞の機能発現に及ぼす影響についての解析を行った。5.アンギオテンシンII等で代償性心肥大を誘導したin vitroの心筋細胞障害モデルにおけるLIMKsの発現・活性解析を行った。6.種々の心疾患モデル動物におけるLIMKsの発現・活性解析を行った。

<研究目的> 近年来，随着发育工程方法的发展，生长因子和转录因子诱导心肌细胞发育和分化的功能作用的分析取得了迅速进展，大多数特异性分化和形态发生的机制仍然存在。未知。在本研究中，我们分析了控制肌动蛋白细胞骨架的LIM激酶（LIMK）在心脏和心肌细胞的发育和分化过程中的功能作用。・目的是阐明分化机制。 <研究结果概要> 1.我们建立了使用ES细胞的心肌细胞原代培养系统和心肌细胞分化系统，并研究了通过使用腺病毒载体进行基因转移进行基因功能分析的可能性。 2.我们使用免疫印迹和RT-PCR分析了LIMKs在心肌细胞原代培养系统和使用ES细胞的心肌细胞分化系统中的表达。 3.我们构建了表达野生型LIMK和突变型LIMK的腺病毒载体。此外，我们研究了突变型 LIMK 的强制表达对 ES 细胞心肌分化（肌节形成）的影响。 4.通过引入多种突变型LIMKs基因，分析了LIMKs对成熟心肌细胞功能表达的影响。 5.我们分析了血管紧张素II诱导代偿性心脏肥大的体外心肌细胞损伤模型中LIMKs的表达和活性。 6.我们分析了LIMKs在各种心脏病模型动物中的表达和活性。

项目成果

Molecular cloning and characterization of Kremen, a novel kringle-containing transmembrane protein.

Kremen（一种新型含 kringle 跨膜蛋白）的分子克隆和表征。

• DOI: 10.1016/s0167-4781(01)00168-3
• 发表时间: 2001-03-19
• 期刊: Biochimica et biophysica acta
• 作者: T. Nakamura;S. Aoki;K. Kitajima;T. Takahashi;K. Matsumoto;T. Nakamura
• 通讯作者: T. Nakamura

Nakamura T., Aoki S., Kitajima, K., Takahashi, T., Matsumoto, K., Nakamura, T.: "Molecular Cloning and Characterization of Kremen, a Novel Kringel-containing Transmembrane protein."Biochimica et Biophysica Acta.. 1518. 63-72 (2001)

Nakamura T.、Aoki S.、Kitajima, K.、Takahashi, T.、Matsumoto, K.、Nakamura, T.：“Kremen（一种新型 Kringel 跨膜蛋白）的分子克隆和表征”。

Functional Involvemnt of LIM-kinases in Progeression of Oocyte Maturation.

LIM 激酶在卵母细胞成熟过程中的功能参与。

• 发表时间: 2001
• 作者: Takahashi; T.; Koshimizu; U.; Abe; H.; Obinata; T.; Nak.amura; T.
• 通讯作者: T.

Molecular mechanisms of non-apoptosis by Fas stimulation alone versus apoptosis with an additional actinomycin D in cultured cardiomyocytes.

在培养的心肌细胞中，仅 Fas 刺激引起的非凋亡与额外放线菌素 D 引起的凋亡的分子机制。

• DOI: 10.1016/s0008-6363(02)00493-5
• 发表时间: 2002-09-01
• 期刊: Cardiovascular research
• 影响因子: 10.8
• 作者: T. Aoyama;G. Takemura;R. Maruyama;K. Kosai;Tomoyuki Takahashi;M. Koda;K. Hayakawa;Y. Kawase;S. Minatoguchi;H. Fujiwara
• 通讯作者: H. Fujiwara

Takahashi, T., Koshimizu, U., Abe, H., Obinata, T., Nakamura, T.: "Functional Involvement of LIM-Kinases in Xenopus Oocyte Maturation."Dev.Biol.. 229. 554-567 (2001)

Takahashi, T.、Koshimizu, U.、Abe, H.、Obinata, T.、Nakamura, T.：“爪蟾卵母细胞成熟中 LIM 激酶的功能参与。”Dev.Biol.. 229. 554-567 (2001)