Development of radiation inducible promoter in prostate cancer

前列腺癌辐射诱导启动子的开发

• 批准号: 21791494
• 负责人: WATANABE Akihiko
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791494/
• 关键词: 腫瘍学; 前立腺癌; 放射線遺伝子治療; 転写因子; 人工プロモーター; 放射線

A promoter library was developed that is composed of DNA fragments constructed by randomly elongating cis-acting elements of transcription factors presumably activated in prostate cancer by radiation, and linking to the TATA box sequence. One promoter with the strongest reactivity to X-ray in LNCap cells of the library was chosen and improved by the introduction of random mutations. A resultant promoter was designated clone 880-8 showing the highest dose-dependent activity enhancement with X-ray irradiation (X-irradiation). A recombinant retrovirus expressing the luciferase gene under the control of clone 880-8 was infected to LNCap that showed 9.12 ± 0.36-fold enhancement of luciferase activity 12 h after X-irradiation at 10 Gy. When the infected cells were inoculated onto nude mice, enhancement of luciferase expression was 4.27 ± 1.36-fold 12 h after X-irradiation at 10 Gy. When LNCap was infected with another recombinant carrying the fcy::fur gene downstream to clone 880-8, fcy::fur expression was enhanced by X-irradiation. It was also shown to increase dose-dependent cell killing ratio with 5-fluorocytosine compared to a counterpart without X-irradiation. These results suggest that the method employed in this study is effective to construct a promoter responsive to stimulation. Such promoters can be utilized for stimulation controlled-gene therapies.

开发了一种启动子文库，该文库由 DNA 片段组成，该 DNA 片段是通过随机延长可能在前列腺癌中通过辐射激活的转录因子的顺​​式作用元件而构建的，并连接到 LNCap 中对 X 射线具有最强反应性的一个启动子。通过引入随机突变选择并改进了文库的细胞，所得启动子被命名为克隆880-8，显示出X射线照射（X-照射）重组体的最高剂量依赖性活性增强。在克隆880-8控制下表达荧光素酶基因的逆转录病毒感染LNCap，在10Gy的X射线照射12小时后，荧光素酶活性增强9.12±0.36倍。 10 Gy X 射线照射后 12 小时，荧光素酶表达为 4.27 ± 1.36 倍。 LNCap 用另一种携带 fcy::fur 基因下游克隆 880-8 的重组体感染，X 射线照射增强了 fcy::fur 表达，与 5-氟胞嘧啶相比，它还显示出增加了剂量依赖性细胞杀伤率。这些结果表明，本研究中采用的方法可有效构建对刺激有反应的启动子，此类启动子可用于刺激控制基因疗法。

项目成果

射線による遺伝子発現制御と前立腺癌の治療応用への検討

放射诱导的基因表达控制及其在前列腺癌治疗中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

前立腺癌細胞株における放射線遺伝子治療用人工プロモーターの開発

前列腺癌细胞系放射基因治疗人工启动子的开发

• 发表时间: 2011
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

放射線による遺伝子発現制御と前立腺癌の治療応用への検討

放射控制基因表达的思考及其在前列腺癌治疗中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: 森井章裕、渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

前立腺癌細胞株において放射線に応答する人工プロモーターの改良

前列腺癌细胞系中响应辐射的人工启动子的改进

• 发表时间: 2009
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

Construction of promoter induced by radiation for human prostate cancer cells.

人前列腺癌细胞辐射诱导启动子的构建。

• 发表时间: 2009
• 作者: Akihiro Morii;Akihiko Watanabe;et al.
• 通讯作者: et al.