Development of radiation inducible promoter in prostate cancer

前列腺癌辐射诱导启动子的开发

• 批准号: 21791494
• 负责人: WATANABE Akihiko
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791494/
• 关键词: 腫瘍学; 前立腺癌; 放射線遺伝子治療; 転写因子; 人工プロモーター; 放射線

A promoter library was developed that is composed of DNA fragments constructed by randomly elongating cis-acting elements of transcription factors presumably activated in prostate cancer by radiation, and linking to the TATA box sequence. One promoter with the strongest reactivity to X-ray in LNCap cells of the library was chosen and improved by the introduction of random mutations. A resultant promoter was designated clone 880-8 showing the highest dose-dependent activity enhancement with X-ray irradiation (X-irradiation). A recombinant retrovirus expressing the luciferase gene under the control of clone 880-8 was infected to LNCap that showed 9.12 ± 0.36-fold enhancement of luciferase activity 12 h after X-irradiation at 10 Gy. When the infected cells were inoculated onto nude mice, enhancement of luciferase expression was 4.27 ± 1.36-fold 12 h after X-irradiation at 10 Gy. When LNCap was infected with another recombinant carrying the fcy::fur gene downstream to clone 880-8, fcy::fur expression was enhanced by X-irradiation. It was also shown to increase dose-dependent cell killing ratio with 5-fluorocytosine compared to a counterpart without X-irradiation. These results suggest that the method employed in this study is effective to construct a promoter responsive to stimulation. Such promoters can be utilized for stimulation controlled-gene therapies.

开发了一个启动子库，该库由通过辐射通过辐射中前列腺癌中的转录因子的顺​​式作用元件的随机拉长构建的DNA片段组成，并链接到TATA盒序列。选择了一个对库中LNCAP细胞中X射线反应性最强的启动子，并通过引入随机突变进行了改进。将最终的启动子指定为克隆880-8，显示出最高剂量依赖性活性增强，并通过X射线照射（X-Irradiation）。将克隆880-8控制下表达荧光素酶基因的重组逆转录病毒感染到LNCAP，在10 Gy X射线后12小时，荧光素酶活性增强了9.12±0.36倍。当感染细胞被接种到裸鼠上时，在10 Gy时X-辐照后，荧光素酶表达的增强为4.27±1.36倍。当LNCAP被另一种重组携带FCY的重组感染时，将FCY :: Fur Gene下游到克隆880-8时，FCY :: fcy :: fur ::通过X-irraradiatiation增强了毛皮表达。与没有X辐射的对应物相比，它还显示出5-氟环胞嘧啶的剂量依赖性细胞杀伤比。这些结果表明，本研究中采用的方法有效地构建了响应刺激的启动子。此类启动子可以用于刺激控制的基因疗法。

项目成果

射線による遺伝子発現制御と前立腺癌の治療応用への検討

放射诱导的基因表达控制及其在前列腺癌治疗中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

前立腺癌細胞株における放射線遺伝子治療用人工プロモーターの開発

前列腺癌细胞系放射基因治疗人工启动子的开发

• 发表时间: 2011
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

前立腺癌細胞株において放射線に応答する人工プロモーターの改良

前列腺癌细胞系中响应辐射的人工启动子的改进

• 发表时间: 2009
• 作者: 森井章裕;渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

放射線による遺伝子発現制御と前立腺癌の治療応用への検討

放射控制基因表达的思考及其在前列腺癌治疗中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: 森井章裕、渡部明彦;他
• 通讯作者: 他

Construction of promoter induced by radiation for human prostate cancer cells.

人前列腺癌细胞辐射诱导启动子的构建。

• 发表时间: 2009
• 作者: Akihiro Morii;Akihiko Watanabe;et al.
• 通讯作者: et al.