ポリ乳酸グラフト化多糖の蛋白質徐放製剤材料としての検討

聚乳酸接枝多糖作为蛋白质缓释制剂材料的研究

基本信息

批准号：
13780697
负责人：
大矢裕一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kansai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質を安定かつ大量に内包し、分解に従って徐放する新しい蛋白質製剤用材料としてポリ乳酸(PLA)グラフト化多糖を応用すること目的として,本年度はデキストランを用いて調製したPLAグラフト化デキストランからの蛋白質内包ミクロスフェア(MS)の調製について検討した。前年度までに確立した方法、すなわち多糖のトリメチルシリル(TMS)化、その残存水酸基を開始点とするL-lactideの開環グラフト重合、脱TMS化というステップを経て、PLAグラフト化デキストランを得た。得られたPLAグラフト化デキストランを用いてW/O/Wエマルション・液中乾燥法により蛋白質内包MSを調製した。モデル蛋白質としてはFITCラベル化アルブミンなどを使用した。共焦点レーザー蛍光顕微鏡観察により、FITCラベル化アルブミンがMS内に均一に分散している様子が観測された。また、MSから放出されたタンパク質の高次構造変化をCDスペクトルを測定することにより考察したところ、PLAグラフト化デキストランMSから放出されたアルブミンは、PLA-MSから放出されたものより変成の程度は低かった。一方,上記のようなTMS化,重合,脱保護というステップではなく,簡便なカップリング(縮合)反応によるPLAグラフト化多糖の合成方法を開発するため,アミノ末端PLAの新規合成についても検討した。その結果,Boc保護されたアミノエタノールのアルコキシドを開始剤としたL-lactideの開環重合により,末端に定量的にアミノ基が導入されたアミノ末端PLAを合成することに成功した。これを用いて,カルボキシメチル化プルラン(CM-Pul)とのカップリング反応を行い,PLAグラフト化プルランを合成することにも成功した。得られたPLAグラフト化プルランは水溶液中でナノメータースケールの集合体を形成することがわかった。

为了将聚乳酸（PLA）接枝多糖作为蛋白质制剂的新材料，稳定地封装大量蛋白质并在分解时缓慢释放蛋白质，今年我们将开发使用葡聚糖制备的PLA接枝葡聚糖蛋白质研究了包封微球（MS）的制备。 PLA接枝右旋糖酐的制备方法是采用去年建立的方法，包括多糖的三甲基硅烷化(TMS)，以L-丙交酯的残余羟基为起点进行开环接枝聚合，然后去除TMS。利用获得的PLA接枝葡聚糖，通过W/O/W乳液/液中干燥方法制备包封蛋白质的MS。使用 FITC 标记的白蛋白作为模型蛋白。共焦激光荧光显微镜显示 FITC 标记的白蛋白均匀分散在 MS 内。此外，我们通过测量CD光谱检查了MS释放的蛋白质的构象变化，发现PLA接枝葡聚糖MS释放的白蛋白变性程度低于PLA-MS释放的白蛋白。另一方面，为了开发一种使用简单的偶联（缩合）反应来合成 PLA 接枝多糖的方法，而不是如上所述的 TMS 形成、聚合和脱保护步骤，我们还研究了氨基-终止了解放军。结果，我们使用Boc保护的氨基乙醇醇盐作为引发剂，通过L-丙交酯的开环聚合成功合成了末端定量引入氨基的氨基末端PLA。利用该方法，我们与羧甲基化普鲁兰多糖（CM-Pul）进行偶联反应，成功合成了PLA接枝普鲁兰多糖。发现所获得的PLA接枝支链淀粉在水溶液中形成纳米级聚集体。