新規CD28ファミリー分子AILIMを介するシグナル伝達機構の解析

新型CD28家族分子AILIM介导的信号转导机制分析

基本信息

批准号：
13771389
负责人：
原田陽介
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771389/
关键词：
T細胞補助シグナル CD28 ICOS AILIM T細胞活性化

项目摘要

AILIM/ICOSは、CD28シグナルと同様にT細胞の増殖やINF-γ、IL-4の産生を誘導するが、CD28シグナルとは違いIL-2産生の増強をほとんど起こさないことが分かっている。そこで、我々はこのような違いがどのようなシグナル伝達経路の違いで生まれてくるのかを解析した。CD28の細胞内領域にはYMNM motifが存在し、PI3-KinaseとGrb2が結合することが知られている。一方、AILIMには同じ位置にYMFM motifが存在しておりPI3-Kinaseは結合するがGrb2は結合しない。我々はAILIMがIL-2promoterの活性化をほとんど起こさないのは、AILIMにGrb2が結合できないことがその理由の1つであるのではないかと考え、AILIMにGrb2を結合させるためにYMFM motifのFをNに置換した変異遺伝子AILIM YMNMを作製しIL-2 promoterの活性を検討した。その結果、この1アミノ酸の変位によりAILIMはIL-2 promoterの活性化を誘導することができるようになった。さらにIL-2 promoter上のどの領域を活性化しているのかを検討したところ、Grb2をAILIMに結合させることでNFAT/AP-1 siteの活性化はCD28と同等に誘導できるようになったが、CD28RE/AP-1 siteとNFκB siteの活性化は十分にはおこらず、YMNM motif以外のCD28細胞内領域がこれらの領域の活性化に必要であることが分かった。これらの結果は、Grb2の結合に影響を与える1アミノ酸の違いがCD28とAILIMを介する補助シグナルの機能的な違いを決定する一因であることを示唆している。

与 CD28 信号类似，AILIM/ICOS 诱导 T 细胞增殖以及 INF-γ 和 IL-4 的产生，但与 CD28 信号不同的是，已知它几乎不增加 IL-2 的产生。因此，我们分析了哪些信号转导途径的差异导致了这些差异。已知YMNM基序存在于CD28的细胞内区域，并且PI3激酶和Grb2与其结合。另一方面，AILIM 在相同位置具有 YMFM 基序，并结合 PI3 激酶，但不结合 Grb2。我们推测AILIM难以激活IL-2启动子的原因之一是Grb2不能与AILIM结合。我们创建了一个突变基因AILIM YMNM，其中N被N取代，并检查了IL-2启动子的活性。结果，这个单一氨基酸的变化使得 AILIM 能够诱导 IL-2 启动子的激活。此外，我们研究了IL-2启动子上的哪个区域被激活，发现通过将Grb2与AILIM结合，可以以与CD28相同的方式诱导NFAT/AP-1位点的激活。发现CD28RE的激活。 /AP-1位点和NFκB位点没有充分出现，并且需要除YMNM基序之外的CD28的细胞内区域来激活这些区域。这些结果表明，影响 Grb2 结合的单个氨基酸差异导致了 CD28 和 AILIM 介导的辅助信号之间的功能差异。