胸腺外分化T細胞の生理的リガンドの探索と感染防御における病因論的役割の解析

寻找胸腺外分化T细胞的生理配体并分析其在预防感染中的病因作用

• 批准号: 13226065
• 负责人: 高橋 一郎
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226065/
• 关键词: 粘膜免疫; 胸腺外分化; 粘膜系T細胞; NKG2D; NKG2D ligand; 感染免疫

腸管上皮細胞の側底面には腸管上皮細胞間リンパ球(IELs)とよばれるCD3T細胞が上皮細胞6個に1個の割合で存在するが、その多くは胸腺外分化のT細胞である.これらCD8αα+sIELsの発達分化を制御する生理的リガンド分子は今なお不明のままである.最近ヒトγδIELsはストレスによって誘導されるMICAを認識すること,またNK細胞とγδT細胞に発現するNKG2D分子がMICAレセプターであることが明らかにされた.さらにRae-1とH60がマウスNK細胞のNKG2Dリガンドとして機能している可能性が示された.本研究ではCD8αα+sIELsの胸腺外分化の分子機構を明らかにする目的で腸管上皮細胞でのNKG2Dリガンドを含む生理的リガンドの同定を試みる.また生理的リガンドの発現を制御する外的要因についても検討を加える。マウス小腸上皮細胞に発現するNKG2Dリガンドの探索:マウスNKG2Dの細胞外ドメインよりなるビオチン化NKG2Dテトラマーを作製し、フローサイトメトリー(FACS)法ならびに免疫組織化学的方法により,NKG2Dリガンドの探索を試みた.その結果,マウス小腸遠位部および大腸近位部粘膜絨毛の陰窩部上皮細胞層に限局してNKG2Dテトラマーと反応するリガンドが局在することが示された.またRac-1 βanti-sense RNAプローブを用いてIn situ hybridization法にてその局在を検討したところ,やはりマウス小腸遠位部ならびに大腸近位部粘膜絨毛の陰窩部上皮に限局してRae-1 β mRNAが発現していることが明らかになり,NKG2Dテトラマーを用いた場合とたいへん酷似した結果が得られた.以上の所見より胸腺外分化CD8αα+IELの機能分化を促す生理的なリガンドのひとつとしてRae-1β を代表とするストレス誘導性のNKG2Dリガンド分子が関与していることが強く示唆された.さらにこのRae-1βのヒトホモローグであるMICA分子をT3b promoterを用いて腸管局所に発現させた遺伝子導入(Tg)マウスを作製したところ,CD4/CD8αα両分子を発現した胸腺外分化IELのpositive selectionが著しく亢進することを見い出した.この所見からもRae-1 βをはじめとする環境ストレス誘導性MHC class Ib分子がIELの発達分化を制御することが支持された.

被称为肠上皮细胞间淋巴细胞（IEL）的 CD3T 细胞以六分之一的比例存在于肠上皮细胞的基底外侧表面，其中大多数是胸腺外分化的 T 细胞。控制 Ls 发育分化的生理配体分子目前尚不清楚，最近，人类 γδ IEL 已被证明可以识别应激诱导的 MICA，以及 NK 细胞和 γδ T 细胞上表达的 NKG。研究表明，2D 分子是 MICA 受体。此外，Rae-1 和 H60 可能作为小鼠 NK 细胞中的 NKG2D 配体发挥作用。我们将尝试鉴定肠上皮细胞中的生理配体，包括 NKG2D 配体。目的是阐明其分子机制。我们还将研究控制生理配体表达的外部因素。寻找小鼠小肠上皮细胞中表达的 NKG2D 配体：制备由小鼠 NKG2D 胞外结构域组成的生物素化 NKG2D 四聚体，并使用流式细胞术 (FACS) 和免疫组织化学方法进行分析。因此，我们尝试寻找NKG2D配体。结果显示，与NKG2D四聚体反应的配体定位于小鼠远端小肠和近端大肠粘膜绒毛的隐窝上皮细胞层。当我们使用 β 反义 RNA 探针通过原位杂交检查其定位时，我们发现 Rae-1结果表明，mRNA被表达，并且获得了与使用NKG2D四聚体时获得的结果非常相似的结果。 根据以上发现，可以将其用作促进胸腺外分化的CD8αα+IEL的功能分化的生理配体。强烈表明应激诱导的 NKG2D 配体分子如 Rae-1β 参与其中。当我们生成启动子在肠道局部表达的转基因（Tg）小鼠时，我们发现表达 CD4/CD8αα 分子的胸腺外分化 IEL 的正选择显着增强。这一发现也表明 Rae 我们的结果支持环境应激诱导的 MHC Ib 类分子（包括 -1β）控制 IEL 的发育分化。

项目成果

Kweon, M., Takahashi, I., et al.: "Development of antigen-induced enterocolitis in SCID mice reconstituted with spleen-derived memory type CD4CD45RB T cells"Gut. 50巻. 299-306 (2002)

Kweon，M.，Takahashi，I.，等人：“用脾源性记忆型 CD4CD45RB T 细胞重建 SCID 小鼠中抗原诱导的小肠结肠炎的发展”Gut. 50. 299-306 (2002)

Takahashi, I., Matsuda.J., et al.: "Colitis-related public T cells are selected in the colonic lamina propria of IL-10 deficient mice"Clinical Immunology. (印刷中). (2002)

Takahashi, I., Matsuda.J., et al.：“在 IL-10 缺陷小鼠的结肠固有层中选择结肠炎相关公共 T 细胞”《临床免疫学》（2002 年出版）。

Kim, J., Takahashi, I., et al.: "Influence of enterotoxin on the mucosal intranet : selective inhibition of extrathymic T cell development in the intestinal IELs by oral exposure to heat-labile toxin"Eur. J. Immunol.. 31巻. 2960-2969 (2001)

Kim，J.，Takahashi，I.，等人：“肠毒素对粘膜内网的影响：通过口服不耐热毒素选择性抑制肠道 IEL 中的胸腺外 T 细胞发育”Eur.J.Immunol。 31. 2960-2969 (2001)

Kunisawa, J., Takahashi, I., et al.: "Sendai virus fusion protein-mediates simultaneous induction of MHC class I/II-dependent mucosal and systemic immune responses via NALT system"J. Immunol.. 167巻. 1406-1412 (2001)

Kunisawa, J.、Takahashi, I. 等人：“仙台病毒融合蛋白通过 NALT 系统介导同时诱导 MHC I/II 类依赖性粘膜和全身免疫反应”J.Immunol.. 167. 1406-1412 (2001)