Rasファミリー活性化因子の多様性からのゲノム進化の検討

从 Ras 家族激活剂的多样性检查基因组进化

基本信息

批准号：
13206085
负责人：
望月直樹
金额：
$ 4.16万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206085/
关键词：
癌ゲノムシグナル伝達蛋白質バイオテクノロジー

项目摘要

研究目的:ヒト低分子量GTP結合蛋白質特にRasファミリー分子のGDP/GTP交換因子(GEF)の全てを明らかにし、線虫から哺乳類にいたる過程での高次機能の獲得とゲノムの進化とを系統的に解析する。Rasファミリー分子は細胞外情報を細胞内情報に変換する重要な蛋白質であり、細胞内情報伝達系を知る上ではこの分子群の機能解析をなくして研究遂行には至らない。我々のこれまでの実績からRas分子の活性化を可視化することでGEFの活性化部位を明らかにして、固体レベルでの機能解析を行なうことにより他分野への蛋白質機能解析の新手法を提供できる。成果:分子の活性化を可視化することに成功した。これまで、GFPタグをつけることで生きた細胞内での分子の局在の変化は検討できていたが、我々は活性化を可視化することに成功した。(1)Ras分子が細胞内で刺激依存性に細胞周囲から活性化されることを示した。分子活性化の可視化の成功には一分子内FRET(Fluorescent Resonance Energy Transfer)原理を利用した。この原理の応用により新たな分子活性化の道を広げた。(2)生細胞でのRas分子の活性化の機構を探るためにこれまでに、アデノウイルスを用いてRas活性化モニター分子の導入も始めているため各種ヒト細胞への導入も可能となっている。Ras活性化モニター分子の動物での発現を試みている。(3)トランスジェニックマウスを作製し個体レベルでのRas活性化機構の解析を計画し現在着手している。

研究目的：阐明所有人类低分子量GTP结合蛋白，特别是Ras家族分子的GDP/GTP交换因子（GEF），系统研究高阶功能的获得和基因组进化过程。从线虫到哺乳动物的过程进行分析。 Ras家族分子是将细胞外信息转化为细胞内信息的重要蛋白质，为了了解细胞内信息转导系统，必须对这组分子进行功能分析才能进行研究。根据我们过去的经验，我们可以通过可视化Ras分子的激活来揭示GEF的活性位点，并通过在固体水平上进行功能分析，为其他领域的蛋白质功能分析提供新的方法。结果：我们成功地将分子的激活可视化。到目前为止，我们已经可以通过附加 GFP 标签来检查活细胞内分子定位的变化，但我们成功地将激活可视化。 (1) 我们发现 Ras 分子以刺激依赖性方式从细胞外周被激活。分子内 FRET（荧光共振能量转移）原理用于成功地可视化分子激活。这一原理的应用开辟了激活分子的新途径。 (2)为了探索Ras分子在活细胞中的激活机制，我们已经开始利用腺病毒引入Ras激活监测分子，使得将其引入到各种人体细胞中成为可能。我们正在尝试在动物中表达 Ras 激活监控分子。 (3)我们目前正在计划创建转基因小鼠并在个体水平上分析Ras激活机制。