三量体Gタンパク質G12ファミリーによる神経機能調節の研究

三聚体G蛋白G12家族神经元功能调节研究

• 批准号: 01J03814
• 负责人: 山口 賀章
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J03814/
• 关键词: G12ファミリー; Rho; GPCR; 細胞内局在; PP5; PP5-TPR; thrombin; LPA; yeast two-hybrid; 神経可塑性; 細胞膜移行

Gα12/13の新規活性測定法の開発と、Gα12/13のレセプターとの共役の特異性決定因子の解明私は、2002年にセリンスレオニンフォスファターゼ5(PP5)が三量体Gタンパク質G12ファミリーの新規エフェクターであることを見いだした。2003年に私はPP5のTPRドメインが活性型Gα12/13と特異的に結合するという特性を利用して、TPRドメインによるpull-downにより、Gα12/13の活性を測定する新規活性測定法を開発した。Gα12とGα13は、下流でRhoという共通の分子を利用する一方、上流のレセプターとの共役に関しては、それぞれに特異性があることが、Gα12/13のドミナントネガティヴ体を用いて示されていた。そこで、私は上記の新規アッセイ法を用いてthrombin及びLPAがGα12及びGα13を、それぞれ特異的に活性化すること、及びこの特異性が、Gα12/13のN末端アミノ酸配列の差に起因することを解明した。近年、神経細胞において、Gα12は細胞体、Gα13はneuropilと局在が異なることが報告された。このことから、Gα12/13とレセプターの細胞内局在の違いが、それらの共役及びシグナリングに重要であると考えられる。

开发测量 Gα12/13 活性的新方法并阐明 Gα12/13 与受体结合的特异性决定因素 我于 2002 年发现丝氨酸-苏氨酸磷酸酶 5 (PP5) 是三聚体 G 蛋白 G12 家族的新成员。发现它是一个效应器。 2003年，我开发了一种新的活性测量方法，利用PP5的TPR结构域与活性Gα12/13特异性结合的特性，通过使用TPR结构域的下拉来测量Gα12/13活性。使用 Gα12/13 的显性失活形式表明，虽然 Gα12 和 Gα13 使用称为 Rho 的共同下游分子，但在与上游受体缀合时，每种分子都具有特异性。因此，使用上述新的测定方法，我证明了凝血酶和LPA分别特异性地激活Gα12和Gα13，并且阐明了这种特异性是由于Gα12/13的N末端氨基酸序列的差异造成的。近年来有报道称，在神经细胞中，Gα12定位于细胞体，Gα13定位于神经毡。这表明 Gα12/13 和受体的细胞内定位差异对于它们的偶联和信号转导很重要。

项目成果

Yamaguchi, Y. et al.: "Gα12 and Gα13 interact with Ser/Thr Protein Phosphatase Type 5 and Stimulate Its Phosphatase Activity"Current Biology. 12. 1353-1358 (2002)

Yamaguchi, Y. 等人：“Gα12 和 Gα13 与 Ser/Thr 蛋白磷酸酶 5 型相互作用并刺激其磷酸酶活性”《当代生物学》12. 1353-1358 (2002)。

Yoshiaki Yamaguchi et al.: "N-terminal Short Sequences of α subunits of G12 family defermine selective couplings to Receptors."The Journal of Biological Chemistry. 278巻・17号. 14936-14939 (2003)

Yoshiaki Yamaguchi 等人：“G12 家族 α 亚基的 N 端短序列决定与受体的选择性偶联。”《生物化学杂志》第 278 卷，第 17 期。14936-14939 (2003)