発がん化防御に関わるXPBおよびXPD遺伝子における変異の分子病態

XPB和XPD基因突变参与致癌保护的分子发病机制

基本信息

批准号：
12213121
负责人：
久武幸司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213121/
关键词：
転写因子バキュウロウイル DNA修復転写 TFIIH プロモーター

项目摘要

1 GAL4-VP16による転写活性化でのERCC3ヘリカーゼ活性の役割組換え体TFIIHの再構成系を用いてTFIIHの変異体を作成し、GAL4-VP16による転写活性化ではXPBヘリカーゼ活性が非常に重要な役割をしていることが明かとなった。XPBヘリカーゼは基本転写ではpromoter openingとpromoter escapeの段階で作用しているが、GAL4-VP16による転写活性化ではどこで作用しているこかを検討した。まず、premeltした鋳型を用いて転写活性化反応を行いTFIIHの変異体の影響を検討した。この結果、転写活性化の際にTFIIHが関与するのはpromoter escapeの段階であることが分かった。またこの作用は基本転写で見られるTFIHの役割とは異なり、転写活性化に特異的である。実際、種々の変異プロモーターを用いて、転写をごく初期の段階で止め、promote escapeの段階で転写活性化の効果が見られるかどうかを調べると、転写のごく初期に転写活性化因子が作用していることが分かった。この、作用には転写活性化因子のみならず、転写補助因子PC4も必要である。この転写のごく初期の段階では、RNA polymerase IIはまだ安定に転写を行っていないようであり、abortiveな転写に終わることが多い。実際、ATPのアナログを用いて、転写のごく初期の段階でXPBの活性を止めると、RNApolymerase IIはpromoterから離れてしまう。以上のことより、転写の活性化にはpreinitiation complexの形成を促進するだけではなく、promoter escapeを促進することが重要であることが分かった。2 DNA除去修復におけるTHIIHの役割TFIIHを用いたヌクレオチド除去修復系を用いるとTFIIHの依存性にin vitroで修復反応が認められる。TFIIHのキナーゼを欠いた変異体は、野生型TFIIHに比べて修復活性が強いようである。現在この系を用いてTFIIH特にそのキナーゼ活性と修復の関係を調べており、TFIIHのキナーゼ活性がNERに抑制的に働いていることが想像される。

1 ERCC3 解旋酶活性在 GAL4-VP16 转录激活中的作用我们使用重组 TFIIH 重建系统创建了 TFIIH 突变体，发现 XPB 解旋酶活性在 GAL4-VP16 转录激活中非常重要，很明显他正在发挥作用。。 XPB 解旋酶在基本转录的启动子打开和启动子逃逸阶段起作用，但我们研究了它在 GAL4-VP16 转录激活过程中的作用位置。首先，我们使用预熔模板进行转录激活反应，以检查 TFIIH 突变体的效果。结果表明，TFIIH参与转录激活的启动子逃逸阶段。此外，这种作用与基本转录中看到的TFIH的作用不同，并且是转录激活所特有的。事实上，当我们使用各种突变启动子在非常早期的阶段停止转录并检查在促进逃逸阶段是否观察到转录激活的效果时，我们发现转录激活子在转录的非常早期阶段起作用。那这一作用不仅需要转录激活因子，还需要转录辅因子PC4。在转录的早期阶段，RNA 聚合酶 II 似乎尚未稳定转录，并且常常以转录失败告终。事实上，如果我们使用 ATP 类似物在转录的早期阶段停止 XPB 活性，RNA 聚合酶 II 就会与启动子分离。由上可知，对于转录激活来说，不仅促进起始前复合物的形成而且促进启动子逃逸也很重要。 2 THIIH 在 DNA 切除修复中的作用当使用使用 TFIIH 的核苷酸切除修复系统时，在体外观察到 TFIIH 依赖性修复反应。 TFIIH 激酶缺陷突变体似乎比野生型 TFIIH 具有更强的修复活性。我们目前正在使用该系统来研究TFIIH（特别是其激酶活性）与修复之间的关系，并且假设TFIIH的激酶活性以抑制方式作用于NER。