ショウジョウバエを用いたシナプスで機能する情報伝達分子の探索

使用果蝇寻找在突触中起作用的信息传递分子

基本信息

批准号：
00J02663
负责人：
曽根雅紀
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

神経回路の形成過程で重要なシナプス形成およびシナプス可塑性の分子機構を解明するために、本研究においては、シナプスに局在する調節因子、特に情報伝達分子のスクリーニング法を開発する。本研究では、これまでに全く試みられていない独自のアプローチとして、ショウジョウバエの遺伝学を用いたシナプス分子のスクリーニング法を開発する。前年度までに、ショウジョウバエのシナプス間隙に局在する因子であるHIG蛋白質のドメイン解析を行い、HIG蛋白質は、第一補体結合ドメインを欠失するとシナプスに輸送されなくなることを見出した。また、一連のコンストラクトを用いたレスキュ実験の結果から、HIG蛋白質のN末端部分がレスキュー能に必要十分であることを見出した。本年度は、まず、引き続いてHIG蛋白質のドメイン解析を行い、全てのdeletion constructについて、シナプスへの輸送能の有無と、hig変異表現型のレスキュー能の有無を調べた。以上の結果に基づいて、第一補体結合ドメインを欠くHIG蛋白質を用いたエクソントラップベクターを作成し、これを用いた形質転換ショウジョウバエを作成し、さらに遺伝学的方法によってこのベクターのゲノムへの挿入系統を多数作成した。今後は、作成した形質転換ショウジョウバエを用いて、hig変異の行動異常のレスキューを指標にして、シナプス間隙に局在する種々の情報伝達分子をスクリーニングしていく予定である。

为了阐明在神经回路形成过程中重要的突触形成和突触可塑性的分子机制，在本研究中，我们将开发一种针对突触局部调节因子，特别是信息传递分子的筛选方法。在这项研究中，我们将开发一种利用果蝇遗传学筛选突触分子的方法，这是一种以前从未尝试过的独特方法。去年，我们对果蝇突触间隙中定位的HIG蛋白进行了结构域分析，发现当第一个补体结合结构域被删除时，HIG蛋白不再被转运到突触。此外，从使用一系列构建体的救援实验的结果来看，我们发现HIG蛋白的N末端部分对于救援能力是必要且充分的。今年，我们首先继续对HIG蛋白进行结构域分析，研究了所有缺失构建体转运至突触的能力以及拯救hig突变表型的能力。基于上述结果，我们利用缺乏第一个补体结合域的HIG蛋白创建了外显子捕获载体，并利用该载体创建了转化的果蝇，然后利用遗传方法将该载体添加到基因组中，创建了许多插入系。未来，我们计划利用我们培育的转化果蝇，以拯救hig突变引起的行为异常为指标，筛选位于突触间隙的各种信息转导分子。