Analysis of effects of molecular chaperone and ER stress on HCV replication

分子伴侣和内质网应激对HCV复制的影响分析

• 批准号: 20790487
• 负责人: NAKAGAWA Mina
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790487/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 分子シャペロン; 小胞体ストレス; サイクロフィリン; HCVレプリコン; Two Hybrid法; C型肝炎ウイルス(HCV); siRNA; Fumarylacetoacetate hydrolase(FAH); 脂質・コレステロール代謝; サイクロスポリンA(CsA); PPI活性

当該研究期間において我々は、HCV増殖により誘導されるシャペロン蛋白とHCV増殖との関連性およびHCVの持続感染や炎症、発癌に関して、これらのシャペロン蛋白や小胞体ストレスが病態に与える影響の解析を遂行し、以下の結果を得た。1) シャペロン蛋白の一種であるサイクロフィリンA,B,CをsiRNAにより発現抑制することでレプリコン増殖は有意な抑制効果を認め、これらのサイクロフィリンがHCV増殖に関与していると考えられた。2) 免疫抑制能の弱いサイクロスポリンDも同様のHCVレプリコン増殖抑制効果がみられ、サイクロスポリンの抗ウイルス効果はサイクロフィリンの活性阻害を介することが確認された。3) Two hybrid法を用いてHCV蛋白とサイクロフィリンA,BおよびCの相互作用を確認したが、いずれの組み合わせでもシグナルは検出されず、HCV蛋白とサイクロフィリンの直接会合は認めなかった。4) ヒト肝臓cDNAライブラリーを対象にTwo Hybrid法による網羅的探索を行い宿主蛋白の網羅的スクリーニングを行ったところ、サイクロフィリンと会合する蛋白としてFumarylacetoacetate hydrolase (FAH)、Homo sapiens insulin-like growth factor binding protein2(IGFBP)が同定された。siRNAによる発現抑制によりウイルス増殖を確認したところFAHによりHCVレプリコン増殖が抑制されることを確認した。今後これらの知見を統合し、宿主蛋白を標的とした新たな抗ウイルス分子標的の同定・新規治療開発をめざし臨床応用への基盤を築くことにつながると思われる。

在本研究期间，我们分析了HCV增殖诱导的伴侣蛋白与HCV增殖之间的关系，以及这些伴侣蛋白和内质网应激对HCV持续感染、炎症和癌变等病理状况的影响，并得到以下结论。结果。 1)通过siRNA抑制作为伴侣蛋白的亲环蛋白A、B和C的表达，观察到对复制子增殖的显着抑制效果，并且认为这些亲环蛋白参与HCV增殖。 2）具有较弱免疫抑制能力的环孢素D也具有类似的HCV复制子增殖抑制作用，证实环孢素的抗病毒作用是通过抑制亲环蛋白活性来介导的。 3)使用两种混合方法证实了HCV蛋白与亲环蛋白A、B和C之间的相互作用，但在任何组合中均未检测到信号，并且没有观察到HCV蛋白与亲环蛋白之间的直接关联。 4)采用Two Hybrid方法对人肝脏cDNA文库进行全面搜索，全面筛选宿主蛋白。富马酰乙酰乙酸水解酶(FAH)和智人胰岛素样生长因子被鉴定为与亲环蛋白结合蛋白2相关的蛋白(。 IGFBP) 被鉴定。通过用siRNA抑制表达来确认病毒增殖，并且确认FAH抑制HCV复制子增殖。未来，我们相信整合这些发现将导致针对宿主蛋白的新抗病毒分子靶点的鉴定以及新疗法的开发，从而为临床应用奠定基础。

项目成果

ウイルス因子からみたC型慢性肝炎の治療前効果予測

病毒因素视角下慢性丙型肝炎治疗前疗效预测

• 发表时间: 2008
• 作者: 中川美奈;ほか
• 通讯作者: ほか

HCVコアおよびNS5A変異からみたBEGインターフェロン治療の効果

从HCV核心和NS5A突变角度观察BEG干扰素治疗效果

• 发表时间: 2008
• 作者: 中川美奈;ほか
• 通讯作者: ほか

Inhibition of hepatitis C virus infection and expression in vitro and in vivo by recombinant adenovirus expressing short hairpin RNA

• DOI: 10.1111/j.1440-1746.2007.05076.x
• 发表时间: 2008-09-01
• 期刊: JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
• 影响因子: 4.1
• 作者: Sakamoto, Naoya;Tanabe, Yoko;Watanabe, Mamoru
• 通讯作者: Watanabe, Mamoru

HCVコアおよびNS5A変異からみた難治性C型慢性肝炎に対するインターフェロン治療の効果予測

基于HCV核心和NS5A突变预测干扰素治疗难治性慢性丙型肝炎的效果

• 发表时间: 2009
• 作者: 中川美奈;ほか
• 通讯作者: ほか

In-vitro and in-vivo Characterization of a new genotype 2b HCV clone and 2b/JFH1 intergenotypic chimera and analyses of the factor that regulate interferon sensitivity

新基因型 2b HCV 克隆和 2b/JFH1 基因间嵌合体的体外和体内表征以及干扰素敏感性调节因素的分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Goki Suda;Naoya Sakamoto;Yasuhiro Itsui;Mina Nakagawa;Kako Mishima;Yuko Karakama;Machi Yamamoto;Cheng-Hsin Chen;Sei Kaki numa;KazuakiChayama;Michio Imamura and Mamoru Watanabe
• 通讯作者: Michio Imamura and Mamoru Watanabe