細胞の遊走および増殖を抑制する因子の構造決定とその作用機序の解明

抑制细胞迁移和增殖的因子的结构测定及其作用机制的阐明

基本信息

批准号：
11878127
负责人：
太和田勝久
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878127/
关键词：
培養細胞動物細胞生理活性物質抑制性因子接着遊走増殖

项目摘要

生体を構成する細胞の機能発現は、細胞内外からの様々な刺激因子によって促進的あるいは抑制的に制御されている。促進性制御に関する研究は非常に多い。しかし、抑制性制御は、促進性制御と同様に生物学的に重要であるにもかかわらず、その研究は極めて少ない。それは、抑制性制御を行う生理活性因子で化学構造まで判明しているものが少数しかないからである。申請者達は最近ブタ脊髄塩抽出物中に抑制性因子の存在することを発見した。この新奇と考えられる抑制性因子の単離・精製を行い、その化学構造を決定し、さらに、その生理作用機序を解明することが、本研究の目的である。1.精製について:いくつかのHPLCカラムやFPLCカラムを試した結果、HPLC用マルチパーパスカラムと弱イオン交換カラムで、この因子をさらに精製できた。しかし、その精製物は完全に単一標本になっているか否かはまだわかっていない。現在、この点を調べている。精製が簡単ではないのは、この因子は水溶性が極めて高く、C18カラムなどの疎水性カラムに全く結合しないからである。2.因子の構造について:今までの研究結果から、この因子がペプチドではなく、しかしアミノ基を持った、(おそらくそのために)中性で正の電荷を持った、非常に水溶性の高い、分子量は350かそれ以上の、比較的低分子であることがわかった。3.作用機序について:タイム・ラプス顕微鏡観察により、この因子の抑制作用は完全に可逆であることが判明した。この因子は、細胞の遊走・接着・増殖を抑制し、細胞の還元活性を低下させる。因子を細胞に作用させ、細胞の還元活性がコントロールの20%以下に下がった時点で、因子を洗い除き、新しい細胞培養液に置き換えると、細胞は、再び、活動を再開し、遊走や増殖を始めた。細胞の生死判定試薬をもちいても、この因子の作用で遊走と増殖を止めた細胞は生きていることもわかっている。これらの結果から、この抑制性因子は、新奇の生理活性物質である可能性が非常に高い。

构成生命体的细胞的功能表达受到来自细胞内外的各种刺激因素的促进或抑制的调节。关于促进控制有大量的研究。然而，尽管抑制性控制在生物学上与促进性控制一样重要，但对此的研究却很少。这是因为只有少数生理活性因子的化学结构已被确定，以进行抑制控制。申请人最近发现猪脊髓盐提取物中存在抑制因子。本研究的目的是分离纯化这种新型抑制因子，确定其化学结构，并阐明其生理作用机制。 1.关于纯化：在尝试了几种HPLC柱和FPLC柱后，我们能够使用HPLC多用途柱和弱离子交换柱进一步纯化该因子。但目前尚不清楚纯化后的产物是否是完全单一的样本。我们目前正在调查这一点。纯化并不容易，因为该因子极易溶于水，并且根本不与疏水性柱（例如 C18 柱）结合。 2、关于因子的结构：从目前的研究结果来看，这个因子不是肽，而是有氨基，呈中性，带正电荷（可能是这个原因），水溶性高。发现它的分子量相对较低，分子量为350或更高。 3.作用机制：延时显微镜显示该因子的抑制作用是完全可逆的。该因子抑制细胞迁移、粘附和增殖，并降低细胞还原活性。当将因子施加到细胞上并且细胞的还原活性已降至对照的20%或更低时，洗掉因子并用新鲜的细胞培养基替换，并且细胞恢复其活性并开始迁移和迁移。我开始增殖。还已知，由于该因子的作用而停止迁移和增殖的细胞仍然存活，即使使用试剂来测定细胞活力也是如此。从这些结果来看，该抑制因子很可能是一种新型生理活性物质。