Cdc7とClaspin/Mrc1による複製フォーク形成及び安定維持機構解析

Cdc7和Claspin/Mrc1分析复制叉形成及稳定维持机制

• 批准号: 08J07497
• 负责人: 早野 元詞
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07497/
• 关键词: Cdc7; Hsk1; Mrc1; 複製開始起点; checkpoint; 分裂酵母; DNA複製チェックポイント; mrc1変異体

本研究において、DNA複製チェックポイントと呼ばれる細胞周期S期途中でのDNA複製の停止を感知し、複製フォークを安定的に維持するカスケードに含まれるMrc1がDNA複製チェックポイントとは異なるDNA複製開始においてどのような役割を持っているのかを分裂酵母をモデル系として使用し、明らかにすることを目的としている。本年実施された研究によって以下の研究成果が得られた。1.Mrc1は複製開始起点へHsk1及びCDK非依存的に初期複製開始起点へ選択的に結合する。Mrc1の複製開始起点への結合をS期初期の細胞を用いて、クロマチン免疫沈降法(ChIP)とマイクロアレイ(chip)を合わせたchIP-chipで観察したところ、S期初期にDNA複製を開始する複製開始起点へ選択的に結合することが分かった。また、この結合はHsk1やCDKの温度感受性変異体でも観察されることから、Mrc1の初期複製開始起点への結合はDNA複製が開始する前、しかもpre-RCが構築された後に、Hsk1及びCDKという2つのS期リン酸化酵素非依存的に結合することが分かった2.Mrc1はチェックポイント非依存的な機能によってhsk1変異による致死を抑圧する。mrc1のチェックポイントにおいて必要な領域を戻して、Checkpoint機能を補ってもhsk1-89変異体による致死はmrc1欠損によって抑圧できた。3.Mrc1はCdc45-MCMの結合を阻害的に制御するMrc1欠損した細胞においてCdc45を免疫沈降すると結合するMcm2の量が増加した。

在这项研究中，目的是澄清MRC1的作用，MRC1的作用包含在级联中，该级联检测到细胞周期的s阶段中DNA复制的终止，并保持稳定的复制叉，使用裂变酵母作为模型系统，并阐明MRC1在DNA复制中的作用与DNA复制的启动，这是DNA复制的作用。今年进行的研究取得了以下结果：1.MRC1独立地与HSK1和CDK中的初始复制启动起源有选择地结合。使用芯片芯片与染色质免疫沉淀（CHIP）和微阵列（CHIP）结合使用MRRC1与复制起源的结合，并使用细胞在早期S期结合，并发现它选择性地结合了复制起源的起源。 Furthermore, this binding is also observed in temperature-sensitive mutants of Hsk1 and CDK, and it was found that binding of Mrrc1 to the initial origin of replication initiation binds in a non-dependent manner, Hsk1 and CDK, before DNA replication begins, and after pre-RC is constructed, two S-phase phosphoenases are bound in dependently, Hsk1 and CDK.2. MRRC1通过与检查点无关的功能抑制HSK1突变引起的致死性。即使在MRC1的检查点返回所需的区域并补充了检查点功能，但由HSK1-89突变体引起的致死性也可以通过MRC1缺乏症来抑制。 3。MRC1抑制Cdc45-MCM在MRC1缺陷型细胞中的结合，CDC45的免疫沉淀增加了结合的MCM2的量。

项目成果

分裂酵母Hsk1キナーゼとMrc1によるDNA複製開始制御機構の解析

裂殖酵母Hsk1激酶和Mrc1的DNA复制起始控制机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Obara T;Oide S;Ohkubo T;et al;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞

MRC1 DELETION AND FOUR BSK MUTANT BYPASS LETHAL DEFECT OF HSK1 DELETION IN FISSION YEAST

裂殖酵母中 MRC1 缺失和四个 BSK 突变体绕过 HSK1 缺失的致命缺陷

• 发表时间: 2009
• 作者: 藤島祥平;野中洋;王子田彰夫;浜地格;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞