Cdc7とClaspin/Mrc1による複製フォーク形成及び安定維持機構解析

Cdc7和Claspin/Mrc1分析复制叉形成及稳定维持机制

• 批准号: 08J07497
• 负责人: 早野 元詞
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07497/
• 关键词: Cdc7; Hsk1; Mrc1; 複製開始起点; checkpoint; 分裂酵母; DNA複製チェックポイント; mrc1変異体

本研究において、DNA複製チェックポイントと呼ばれる細胞周期S期途中でのDNA複製の停止を感知し、複製フォークを安定的に維持するカスケードに含まれるMrc1がDNA複製チェックポイントとは異なるDNA複製開始においてどのような役割を持っているのかを分裂酵母をモデル系として使用し、明らかにすることを目的としている。本年実施された研究によって以下の研究成果が得られた。1.Mrc1は複製開始起点へHsk1及びCDK非依存的に初期複製開始起点へ選択的に結合する。Mrc1の複製開始起点への結合をS期初期の細胞を用いて、クロマチン免疫沈降法(ChIP)とマイクロアレイ(chip)を合わせたchIP-chipで観察したところ、S期初期にDNA複製を開始する複製開始起点へ選択的に結合することが分かった。また、この結合はHsk1やCDKの温度感受性変異体でも観察されることから、Mrc1の初期複製開始起点への結合はDNA複製が開始する前、しかもpre-RCが構築された後に、Hsk1及びCDKという2つのS期リン酸化酵素非依存的に結合することが分かった2.Mrc1はチェックポイント非依存的な機能によってhsk1変異による致死を抑圧する。mrc1のチェックポイントにおいて必要な領域を戻して、Checkpoint機能を補ってもhsk1-89変異体による致死はmrc1欠損によって抑圧できた。3.Mrc1はCdc45-MCMの結合を阻害的に制御するMrc1欠損した細胞においてCdc45を免疫沈降すると結合するMcm2の量が増加した。

在这项研究中，我们证明了 Mrc1 参与 DNA 复制的启动，DNA 复制检查点是一个级联，可在细胞周期的 S 期感知 DNA 复制的停滞并稳定地维持复制叉。这与 DNA 复制检查点不同，本研究的目的是使用裂殖酵母作为模型系统来阐明其发挥的作用。今年进行的研究取得了以下研究成果。 1. Mrc1 以不依赖于 Hsk1 和 CDK 的方式选择性地结合早期复制起点。我们使用结合了染色质免疫沉淀（ChIP）和微阵列（芯片）的chIP-chip，观察了Mrc1与早期S期细胞的复制起点的结合，发现DNA复制在早期S期开始。选择性地结合到复制起点。此外，在 Hsk1 和 CDK 的温度敏感突变体中也观察到这种结合，表明 Mrc1 与早期复制起点的结合发生在 DNA 复制起始之前以及在 Mrc1 构建之后。以独立于两种 S 期激酶的方式，2. Mrc1 通过检查点独立功能抑制 hsk1 突变引起的致死率。即使恢复了mrc1必要的检查点区域并补充了检查点功能，hsk1-89突变体引起的致死率也可以通过mrc1删除来抑制。 3. Mrc1 抑制 Cdc45-MCM 结合。当 Cdc45 在 Mrc1 缺陷细胞中进行免疫沉淀时，结合的 Mcm2 量增加。

项目成果

MRC1 DELETION AND FOUR BSK MUTANT BYPASS LETHAL DEFECT OF HSK1 DELETION IN FISSION YEAST

裂殖酵母中 MRC1 缺失和四个 BSK 突变体绕过 HSK1 缺失的致命缺陷

• 发表时间: 2009
• 作者: 藤島祥平;野中洋;王子田彰夫;浜地格;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞

分裂酵母Hsk1キナーゼとMrc1によるDNA複製開始制御機構の解析

裂殖酵母Hsk1激酶和Mrc1的DNA复制起始控制机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Obara T;Oide S;Ohkubo T;et al;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞