赤痢菌の腸管感染におけるエフエクターの役割の解明

阐明志贺氏菌肠道感染中效应器的作用

基本信息

批准号：
08F08720
负责人：
笹川千尋
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08720/
关键词：
赤痢菌エフェクター

项目摘要

赤痢菌をはじめとするグラム陰性病原細菌の多くはIII型分泌装置を持ち、これを通じて種々のエフェクターを宿主細胞へ分泌して感染を成立する。赤痢菌の場合には、III型分泌装置より50種類以上のエフェクターを分泌することが推定されているが、腸上皮細胞へ侵入後に菌が分泌するエフェクターの役割については、未だ多くが不明である。本研究では細胞内の赤痢菌から宿主細胞へ分泌されるエフェクターOspHについて、その感染に果たす役割を明らかにすることを目的とした。前年度の研究の結果、赤痢菌OspH遺伝子の導入による用いて、培養細胞発現ベクターを作製したが、発現を確認することが困難であった。そこで平成21年度は、哺乳動物のコドン使用頻度に最適化したOspH発現ベクターを構築して、OspHの細胞内発現系を再構築し、OspH発現細胞を細胞生物学的に精査した。その結果、OspHは細胞骨格系等の細胞内高次構造を不安定化させる因子であることが示唆された。さらに、OspHの標的宿主因子を同定するために、GST-OspHタンパク質を用いたプルダウンアッセイを行うとともに、精製タンパク質をタンパク質アレイ解析に供し、複数の標的宿主因子候補を同定した。現在これらの標的宿主因子候補との結合と、OspH活性における作動メカニズムの解析を行っている。

许多革兰氏阴性的致病细菌（包括志贺氏菌）具有III型分泌装置，通过该设备将各种效应子分泌到宿主细胞中，从而导致感染。在志贺氏菌的情况下，据估计，从III型分泌装置中分泌了50多种效应子，但是在入侵肠上皮细胞后细菌分泌的效应子的作用仍然未知。这项研究旨在阐明从志贺氏菌内细胞分泌为宿主细胞的效应子的作用，在感染中。由于上一年的研究，使用志贺氏菌基因的引入制备了培养的细胞表达载体，但很难确认表达。因此，在2009年，构建了针对哺乳动物中密码子使用频率进行优化的Isph表达矢量，以重建Osph的细胞内表达系统，并以细胞生物学方式检查了表达的细胞。结果表明，Ish是破坏细胞内高阶结构（例如细胞骨架系统）的因素。此外，为了识别ISH的靶宿主因子，进行了使用GST磷蛋白的下拉测定，并对纯化的蛋白质进行了蛋白阵列分析，以鉴定多个候选靶宿主因子。当前，我们正在分析与这些候选目标宿主因素的结合以及在Isph活性中的激动剂机制。