ヘリケース機能異常による発癌機構の解析

解旋酶功能障碍致癌机制分析

基本信息

批准号：
11138211
负责人：
菅原稔
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウェルナー症候群は、遺伝性早老であるとともにその特徴の一つとして悪性腫瘍の頻度が高く、1996年原因遺伝子がDNAヘリケースをコードしている遺伝子であることが明らかにされたが、生体内における機能は未だ明らかではない。我々はウェルナーヘリケースの機能異常と老化・発癌機構との関連を明らかにするため、ジーンターゲッティング法によりヒトウェルナー患者で認められたのと同様の変異を持つノックアウトマウスを樹立し、このマウスを個体及び細胞レベルで解析を行っており、以下に要約する。【個体レベルの解析】1.ホモ接合型変異個体は、ほぼメンデル則に従い正常に生まれてくる。2.40週までの各臓器・組織において、ホモ接合型変異個体では腫瘍形成は観察されなかった。3.経過観察で100週齢に達した群もあるが、ホモ接合型変異個体の寿命については、野生型に比べ特に変化は認められなかった。4.13・26・40週において野生型及びホモ接合型の個体における組織化学的解析を行った結果、各臓器における変化はマイルドなものが多かった。比較的顕著な変化として、ホモ個体の雄の唾液腺の上皮分泌顆粒の減少と、雌の卵巣萎縮が認められたが、精巣においては特に異常を認めなかった。【細胞レベルの解析】1.胎仔より初代線維芽培養細胞(MEF:Mouse embryonic fibroblasts)を採取し、細胞の増殖活性を野生型とヘテロ、ホモ接合型胎仔由来の細胞間で比較した結果、ホモ接合型MEFは、野生型に対して約60%の増殖にとどまり、ヘテロ個体由来の細胞ではほぼその中間のgrowth activityを示した。2.MEFを材料として姉妹染色分体交換(Sister chromatid exchange:SCE)検出の条件検討を行い、ギムザ染色によって光顕で撮影する方法が整い組換え修復異常の解析可能となった。今後も継続して詳細な解析が必要である。

Werner综合征是一种遗传性过早衰老，其特征之一是恶性肿瘤发生率高。1996年，其致病基因被揭示为编码DNA解旋酶的基因，但其在体内的功能仍不清楚。。为了阐明Werner解旋酶功能障碍与衰老和致癌机制之间的关系，我们利用基因靶向方法建立了与人类Werner患者中观察到的突变相似的基因敲除小鼠，并将这些小鼠转化为个体并在细胞水平上进行分析。，总结如下。【个体层面分析】 1、纯合突变个体按照孟德尔规则正常诞生。在长达 2.40 周的纯合突变体个体的任何器官或组织中均未观察到肿瘤形成。 3.虽然在后续观察中部分群体已达到100周龄，但与野生型相比，纯合突变体个体的寿命没有观察到特别的变化。 4.13、26和40周时对野生型和纯合个体的组织化学分析显示，每个器官的大部分变化都是轻微的。比较显着的变化是纯合子男性唾液腺上皮分泌颗粒减少，女性卵巢萎缩，但睾丸未见特殊异常。 [细胞水平分析] 1.从胎儿中收集原代成纤维细胞培养细胞(MEF：小鼠胚胎成纤维细胞)，比较来自野生型、杂合子和纯合子胎儿的细胞的细胞增殖活性，并测定合子MEF的生长活性。仅约为野生型的60%，来自杂合个体的细胞的生长活性大约介于两者之间。 2. 我们研究了以MEF为材料检测姐妹染色单体交换（SCE）的条件，并开发了一种使用吉姆萨染色的光学显微镜成像方法，使得分析重组修复异常成为可能。未来还需要继续详细分析。