線溶因子を介したVitronectinプロセッシング制御と細胞死制御機構の解明

阐明纤溶因子介导的玻连蛋白加工控制和细胞死亡控制机制

• 批准号: 25861143
• 负责人: 羽澤 勝治
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25861143/
• 关键词: Vitronectin; PAI-1; プロセッシング; 放射線

Vitronectin (VN)は主に肝臓で産生される。この時、プロテアーゼ（Furin）による切断（プロセッシング）を受け、2種類のフォーム（全長型VN75・切断型VN75/10）が存在する。このVNフォーム形成過程に対する線溶系因子Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI-1)の影響を検討し、以下の結果を得た。ヒト組み換え型たんぱく質を用いた解析から、rVNとrFurinを至適条件下で反応させるとすべてのVNが切断型VN65/10になった。この時、rPAI-1が存在することで、FurinによるVNのプロセッシングは阻害された。また、大腸菌発現系で精製した野生型rPAI-1WT及びVNとの結合性が弱い変異型rPAI-1MTについて検討すると、rPAI-1MTはrPAI-1WTに比べてrVNプロセッシング阻害効果は弱かった。VN及びPAI-1遺伝子をHEK293細胞に共発現させると、VN遺伝子単独発現に比べVNのプロセッシングは強く抑制された。この時、共発現した細胞では全長型VN75が細胞外（培養液中）に放出されていた。さらに、共発現細胞では細胞内及び養液中のVNはPAI-1と複合体を形成していた。放射線被ばくした肝臓由来癌細胞HepG2はPAI-1の上昇、及びVNプロセッシングの抑制が認められた。放射線照射後のHUVECに対する生存支持効果はrVN（全長型VN75・切断型VN75/10）とrFurinで処理した切断型VN75/10を比較すると、rVNは切断型VN65/10よりも強い活性を示した。以上のことから、組織傷害時に誘導されるPAI-1はVNと結合し、FurinによるVNプロセッシングを抑制し、細胞死抑制効果の高い全長型VN75の放出を制御していることが明らかになった。

玻璃体素（VN）主要在肝脏中产生。目前，在蛋白酶（Furin）的裂解（加工）下存在两种类型的泡沫（全长VN75和截短的VN75/10）。研究了纤维蛋白分解因子纤溶蛋白原激活剂抑制剂1（PAI-1）对VN泡沫形成过程的影响，并获得了以下结果。使用人重组蛋白的分析表明，当RVN和RFURIN在最佳条件下反应时，所有VNS都被截断了VN65/10。此时，RPAI-1的存在抑制了Furin的VN处理。此外，在检查与野生型RPAI-1WT和VN具有弱结合特性的突变体RPAI-1MT（通过大肠杆菌表达系统纯化）时，RPAI-1MT的抑制RVN处理效果较弱，而RVN处理比RPAI-1WT较弱。与单独的VN基因的表达相比，HEK293细胞中的VN和PAI-1基因共表达VN和PAI-1基因。目前，在共表达的细胞中释放全长VN75（在培养基中）。此外，在共表达的细胞中，VNS细胞内和养分流体与PAI-1形成复合物。受辐射暴露的肝脏癌细胞HEPG2显示PAI-1的升高和VN加工的抑制作用。将辐射后对HUVEC的存活支持效应与RVN（全长VN75，截短的VN75/10）和用RFURIN处理的截短的VN75/10进行比较，RVN的活性比截短的VN65/10更强。从上面可以揭示出在组织损伤期间诱导的PAI-1与VN结合，抑制FURIN的VN处理，并调节全长VN75的释放，这对抑制细胞死亡具有很高的作用。

项目成果

線溶因子を介したVitronectinプロセッシング制御と細胞死制御機構の解明」

阐明纤溶因子介导的玻连蛋白加工控制和细胞死亡控制机制”

• 发表时间: 2013
• 作者: Y Yoshimura;M Kikuchi;S Ueno;E Okumura;H Hiraishi;C Hasegawa;G B Remijn;K Shitamichi;T Munesue;T Tsubokawa;H Higashida;Y Minabe;Aya Takahashi;Shuji Kariya;高橋 綾;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;平野昭吾;丸山哲郎;丸山哲郎;Tetsuro Maruyama;羽澤 勝治
• 通讯作者: 羽澤 勝治