造血幹細胞複製因子の同定・単離とその実用化

造血干细胞复制因子的鉴定分离及其实际应用

基本信息

批准号：
10877155
负责人：
平井久丸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに多くの造血因子が同定・単離されたが、いずれも多能性造血幹細胞を増やすものではなく、ある程度分化した幹細胞を増殖させるとともに分化を促進する因子である。Notchは細胞内領域のみに切断されることにより、ligand非依存性の活性化型Notch(aNotch)となるが、このaNotchが造血幹細胞を増幅できる可能性が考えられている。myeloid系の分化モデルとして、マウス骨髄系前駆細胞株である32DのG-CSFによる好中球への分化を、erythroid系の分化モデルとしてマウスフレンド赤白血病細胞株F5-5のDMSO及びactivinによる赤芽球系細胞への分化を用い、aNotch1の分化に対する影響を調べた。その結果、aNotch1により、それらの分化は抑制されることが示された。さらに、分化抑制効果がどの段階で働いているかを調べるため、32DおよびF5-5を用いて、myeloid specificな転写因子としてはC/EBPα,C/EBPε,PU.1,AML1b,c-myb,GATA-2について、erythroid specificな転写因子としてはSCL,GATA-1,GATA-2,NF-E2(p45),MafK(p18),EKLF,c-mybについて分化刺激の前後での発現量を比較した。その結果、分化刺激により活性化型Notch1発現細胞およびコントロール細胞の両者において、これらのlineage specificな転写因子は同様の発現パターンを示した。しかし、GATA-2は活性化型Notch1発現細胞でのみ分化刺激後も発現が維持されており、Notch1による分化抑制効果が、GATA-2を介している可能性が示唆された。

尽管迄今为止已鉴定和分离出许多造血因子，但它们都不是增加多能造血干细胞数量的因子，而是对已分化到一定程度的干细胞进行增殖和促进分化的因子。当Notch仅被切割到细胞内区域时，它成为Notch的配体非依赖性激活形式(aNotch)，并且人们认为该aNotch可能能够扩增造血干细胞。作为骨髓分化模型，小鼠骨髓祖细胞系32D通过G-CSF分化为中性粒细胞，作为红细胞分化模型，小鼠Friend红白血病细胞系F5-5通过DMSO和激活素分化为中性粒细胞。在胚细胞中，我们研究了 aNotch1 对分化的影响。结果表明aNotch1抑制了它们的分化。此外，为了研究分化抑制作用在哪个阶段发挥作用，我们使用32D和F5-5来鉴定骨髓特异性转录因子，例如C/EBPα、C/EBPε、PU.1、AML1b、c-myb , 关于GATA-2, 红细胞关于特定转录因子，我们比较了分化刺激前后SCL、GATA-1、GATA-2、NF-E2 (p45)、MafK (p18)、EKLF和c-myb的表达水平。结果，在分化刺激后，这些谱系特异性转录因子在表达激活的Notch1的细胞和对照细胞中表现出相似的表达模式。然而，即使在分化刺激后，GATA-2仅在表达Notch1的活化细胞中维持表达，这表明Notch1的分化抑制作用可能是由GATA-2介导的。