薬力学および免疫機能モニタリングによる臓器移植患者の包括的支援体制の構築

利用药效学和免疫功能监测构建器官移植患者综合支持系统

基本信息

批准号：
23590179
负责人：
葛谷孝文
金额：
$ 3万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

臓器移植後に使用される各種免疫抑制剤の薬剤暴露時間によるリンパ球の増殖抑制効果について健常人の末梢血リンパ球を用いたin vitroの系で検討した。始めに、添加した免疫抑制剤の洗浄方法について検討を行い、分析機器(シクロスポリン:CLIA法、ミコフェノール酸HPLC)の検出限界以下まで洗浄できていることを確認後以下の実験を行った。CFSE染色した末梢血リンパ球に免疫抑制剤(シクロスポリン、ミコフェノール酸)添加後、anti-CD3/28 microbeadsで刺激し3日間培養した。培養期間中、刺激1日または2日後に薬剤洗浄を行った。3日間培養後各々の群におけるTリンパ球をCD3で染色し、細胞増殖抑制効果をフローサイトメトリーにより観察し、薬剤間における特徴を比較検討した。その結果シクロスポリンは3日の薬剤暴露に比し1日の暴露後の薬剤除去で同程度のリンパ球増殖抑制効果が観察された(3日の暴露で47±15%の抑制、1日の曝露で37±13%の抑制)。一方、ミコフェノール酸では1日の暴露後の洗浄ではリンパ球増殖は十分抑制されず、暴露時間によるリンパ球の増殖抑制効果に関してシクロスポリンとは異なる傾向を示した(3日の暴露で83±10%の抑制、2日の暴露で73±6%の抑制、1日の暴露で29±11%の抑制)。これらの結果からミコフェニール酸モフェチルは時間に依存した免疫抑制効果を発揮し、シクロスポリンに関しては一度リンパ球の増殖を抑制することにより継続的な効果が期待できることが示唆された。このことはT細胞受容体の刺激後速やかなカルシニューリンの活性を阻害することが重要であり、初期段階の阻害によりその後の細胞増殖はある程度の期間抑制できることが示唆された。

我们使用健康个体的外周血淋巴细胞在体外系统中研究了器官移植后使用的各种免疫抑制药物对淋巴细胞增殖的抑制作用，取决于药物暴露时间。首先，我们研究了添加的免疫抑制剂的清洗方法，并在确认可以清洗到分析设备的检测限以下（环孢菌素：CLIA法、霉酚酸HPLC）后，进行了以下实验。向CFSE染色的外周血淋巴细胞中添加免疫抑制剂（环孢素、霉酚酸）后，用抗CD3/28微珠刺激并培养3天。培养期间，刺激后1或2天进行药物洗涤。培养3天后，对各组T淋巴细胞进行CD3染色，流式细胞术观察细胞增殖抑制作用，并比较检测药物间的特性。结果，与药物暴露3天相比，暴露1天后去除药物时，环孢素对淋巴细胞增殖具有相似的抑制作用（暴露3天后抑制47±15%，暴露1天后抑制47±15%）暴露量（37 ± 13% 抑制）。另一方面，麦考酚酸在暴露1天后，通过洗涤并没有充分抑制淋巴细胞增殖，并且在取决于暴露时间的淋巴细胞增殖抑制效果方面表现出与环孢菌素不同的趋势(暴露3天后为83±10％)。暴露）％抑制，暴露2天后抑制73±6％，暴露1天后抑制29±11％）。这些结果表明，吗替麦考酚酯发挥时间依赖性免疫抑制作用，而环孢素一旦抑制淋巴细胞增殖，就有望产生持续的作用。这表明在T细胞受体刺激后立即抑制钙调神经磷酸酶活性很重要，并且初始阶段的抑制可以在一定时间内抑制随后的细胞增殖。