薬力学および免疫機能モニタリングによる臓器移植患者の包括的支援体制の構築

利用药效学和免疫功能监测构建器官移植患者综合支持系统

基本信息

批准号：
23590179
负责人：
葛谷孝文
金额：
$ 3万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

臓器移植後に使用される各種免疫抑制剤の薬剤暴露時間によるリンパ球の増殖抑制効果について健常人の末梢血リンパ球を用いたin vitroの系で検討した。始めに、添加した免疫抑制剤の洗浄方法について検討を行い、分析機器(シクロスポリン:CLIA法、ミコフェノール酸HPLC)の検出限界以下まで洗浄できていることを確認後以下の実験を行った。CFSE染色した末梢血リンパ球に免疫抑制剤(シクロスポリン、ミコフェノール酸)添加後、anti-CD3/28 microbeadsで刺激し3日間培養した。培養期間中、刺激1日または2日後に薬剤洗浄を行った。3日間培養後各々の群におけるTリンパ球をCD3で染色し、細胞増殖抑制効果をフローサイトメトリーにより観察し、薬剤間における特徴を比較検討した。その結果シクロスポリンは3日の薬剤暴露に比し1日の暴露後の薬剤除去で同程度のリンパ球増殖抑制効果が観察された(3日の暴露で47±15%の抑制、1日の曝露で37±13%の抑制)。一方、ミコフェノール酸では1日の暴露後の洗浄ではリンパ球増殖は十分抑制されず、暴露時間によるリンパ球の増殖抑制効果に関してシクロスポリンとは異なる傾向を示した(3日の暴露で83±10%の抑制、2日の暴露で73±6%の抑制、1日の暴露で29±11%の抑制)。これらの結果からミコフェニール酸モフェチルは時間に依存した免疫抑制効果を発揮し、シクロスポリンに関しては一度リンパ球の増殖を抑制することにより継続的な効果が期待できることが示唆された。このことはT細胞受容体の刺激後速やかなカルシニューリンの活性を阻害することが重要であり、初期段階の阻害によりその後の細胞増殖はある程度の期間抑制できることが示唆された。

使用外周血血液淋巴细胞在体外系统中研究了器官移植后使用的各种免疫抑制剂通过暴露于药物的暴露时间来抑制淋巴细胞增殖的作用。首先，我们研究了洗涤添加的免疫抑制剂的方法，并确认分析仪器（环孢菌素：Clia方法，霉酚酸HPLC）能够在检测限下洗涤，然后进行以下实验。将CFSE染色的外周血淋巴细胞添加到免疫抑制剂（环孢霉素，霉酚酸）中，然后用抗CD3/28微粒刺激3天。在培养期间刺激后1或2天进行药物洗涤。培养3天后，对每组的T淋巴细胞用CD3染色，并通过流式细胞仪观察到抑制细胞生长的作用，并比较和检查药物之间的特性。结果，与药物暴露3天相比，在暴露1天后的药物去除药物（在暴露3天后抑制47±15％，暴露3天后的抑制作用为47±13％，暴露后的37±13％的抑制作用），观察到环孢素对淋巴细胞增殖的抑制作用相似。另一方面，霉酚酸在暴露一天后洗涤时没有充分抑制淋巴细胞增殖，并且在暴露时间暴露时间导致的淋巴细胞生长抑制的影响方面显示出与环孢菌素的不同趋势，暴露于3天，暴露于83±10％，被抑制了83±10％，被抑制了73％，73％和1％的时间为6％，而1％的1％和1％的人抑制。这些结果表明，霉酚酸莫夫蒂尔具有时间依赖性的免疫抑制作用，并且可以预期环孢素通过抑制淋巴细胞增殖而具有连续作用。这表明，刺激T细胞受体后迅速抑制钙调神经素的活性，并且早期抑制可以抑制一段时间后随后的细胞增殖。