完全長cDNAライブラリを用いたダニアレルギーワクチンの開発

利用全长cDNA文库开发尘螨过敏疫苗

基本信息

批准号：
12J40160
负责人：
二瓶秋子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J40160/
关键词：
ダニアレルギーワクチン完全長cDNA

ダニアレルギーワクチン完全長cDNA

项目摘要

ダニアレルギーワクチンの開発基盤の確立を目的として、11,520のコナヒョウヒダニ由来完全長cDNAとその塩基配列を基に、新規ダニ抗原のスクリーニングを行った。これまでの研究成果により選択された20の既知抗原クローン群Dおよび20の新規抗原候補クローン群HAを、GeneGunを用いてマウスに免疫し、免疫応答を解析したところ、D, HAともに、ダニ抗原特異的な脾臓および所属リンパ節細胞の増殖およびサイトカイン産生量が、コントロールに比べて上がっていた。このことから、免疫したこれらのクローンによるマウス体内でのダニ特異的免疫応答の誘導が確認された。HAを、発現量の多かったものから5クローンずつ4つのサブセット(HA1, HA2, HA3, HA4)に分割し、同様の手法でマウスに免疫した後、ダニ特異的免疫応答を解析した。その結果、HA3を免疫したマウスの脾臓細胞において、ダニ抗原特異的なサイトカイン産生量が上昇しており、また、HA3免疫マウスの血清中に、ダニ抗原特異的なIgG産生が確認された。次に、HA3を構成する5クローンを個別にマウスに免疫し、同様の手法で免疫応答を解析したが、ダニ特異的な免疫応答を有意に誘導したクローンは無かった。これらの結果より、HAを構成する20のクローンのうち、マウスに免疫する事によりダニ特異的な免疫応答を誘導するクローンはHA3を構成する5つのクローンに絞り込まれた。しかし、これらの5つを個別に免疫するとその効果が見られなくなったことから、ダニ特異的免疫応答を誘導するためには複数のクローンを同時にマウスに免疫する必要がある可能性が示唆された。ここまでの成果は、第42回日本免疫学会にて発表した。一方で、本研究課題と同じスキームでマラリアワクチンのスクリーニングをおこなった研究を論文にまとめ、発表した(Exp、Parasitol. 2013)。

为了建立螨过敏疫苗的开发基础，我们基于源自螨虫及其碱基序列的11,520个全长CDNA筛选了新的螨抗原。基于先前的研究结果选择了20个已知的抗原克隆组D和20个新的抗原候选克隆组HA，并分析了免疫反应，并且D和HA的增殖和细胞因子产生均与对照组相比都在增加D和HA。这证实了这些免疫克隆在小鼠中诱导螨特异性免疫反应。 HA从高表达水平分为4个子集（HA1，HA2，HA3，HA4），每个水平是5个克隆，使用相同的方法对小鼠进行了免疫，并分析了螨虫的螨特异性免疫反应。结果，用HA3免疫的小鼠的脾细胞增加了螨抗原特异性细胞因子的量，并且在HA3免疫小鼠的血清中证实了螨虫抗原特异性IgG的产生。接下来，用五个组成HA3的克隆对小鼠进行了免疫，并使用相同的方法分析了免疫反应，但没有明显诱导螨特定的免疫反应。从这些结果来看，在组成HA的20个克隆中，通过免疫小鼠诱导螨虫特异性免疫反应的克隆被缩小到构成HA3的五个克隆。但是，这五种单独免疫的效果不再被发现，这表明可能有必要同时免疫多个克隆以诱导特定的tick特定免疫反应。到目前为止，结果是在第42届日本免疫学会提出的。另一方面，使用与本研究主题相同的方案进行了疟疾疫苗筛查的研究（Exp，Parasitol。2013）。