Elucidation of the mechanisms of latent replication and genome maintenance in KSHV.

阐明 KSHV 中潜在复制和基因组维持的机制。

基本信息

批准号：
19790336
负责人：
OHSAKI Eriko
金额：
$ 2.38万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790336/
关键词：
分子 KSHV 潜伏感染ゲノム複製 LANA 核マトリックス宿主複製開始因子

项目摘要

カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)は細胞周期に同調した複製と分裂時の均等なゲノム分配機構により潜伏感染を維持している。KSHVゲノムの潜伏感染複製にはウイルス因子LANAと複製開始起点(ori-P)としてTerminal repeat(TR)が必要であり,ORC, Cdc6, Cdt1などの宿主複製開始因子(pre-RC)を集結させて達成されると考えられる。本研究では,LANAが難溶性分画(核マトリックス分画)へ集積することを明らかにした。この結果はIFAによる細胞内局在と一致した。さらに,TR挿入プラスミドの複製にはLANA の核マトリックス分画への局在が必要であった。細胞分画後のOri-P領域の局在をPCRにより調べたところ,LANAの局在と同様に核マトリックス分画に局在が見られた。LANAは細胞周期を通じてこの分画に存在する一方,TR はG1期特異的な局在であった。よってLANA依存的にOri-P領域が核マトリックス上にリクルートされ,G1期にpre-RCの形成が行なわれることで複製を開始し,複製後のDNA 領域は核マトリックス上から遊離することが示唆された。本結果は, LANAとpre-RCとの相互作用を重要視したこれまでの見解について問題提起するものである。また,KSHVゲノム内のTR近傍にmatrix-attachment region(K-MAR)の特徴を示す領域(K-MAR)を見いだした。K-MAR を挿入したGFP発現G418耐性プラスミドを導入した細胞は薬剤選択下で有意に高いコロニー形成能を示した。K-MARは自立複製能力を持たないことから,薬剤耐性遺伝子のより安定な発現に関与していることが示唆された。Ori-PやK-MARによる複製・分配・維持機構や遺伝子安定発現機構を明らかにすることで,将来的には遺伝子治療用ベクター開発にも有用な情報が得られるものと考えられる。

Kaposi与肉瘤相关的疱疹病毒（KSHV）通过细胞周期同步复制和分裂过程中相等的基因组分布机制维持潜在的感染。 KSHV基因组的潜在感染复制需要病毒因子LANA和末端重复（TR）作为复制起始（ORI-P）的起源，并且被认为是通过组装的宿主起始因子（PRE-RC）（例如ORC，CDC6和CDT1）来实现的。这项研究表明，LANA积累了可溶性的部分（核基质分数）。该结果与IFA的亚细胞定位一致。此外，复制TR插入质粒需要将LANA定位于核基质部分。通过PCR研究了细胞分馏后ORI-P区域的定位，并在与LANA相似的核基质级分中发现了定位。尽管LANA在整个细胞周期中存在于此部分中，但TR是G1期特异性定位。因此，建议以LAN依赖性的方式将ORI-P区域募集到核基质上，并且Pre-Rc的形成发生在G1期间，导致复制开始，表明复制后的DNA区域从核基质中释放出来。该结果提出了有关以前的观点的疑问，该观点强调了LANA与PER-RC之间的相互作用。此外，在KSHV基因组内的TR附近发现了显示基质 - 辅助区域（K-MAR）特征的区域（K-MAR）。在药物选择下，插入K-MAR插入的抗GFP G418抗质粒的细胞表现出明显更高的菌落形成能力。 K-MAR没有独立复制的能力，表明它与耐药性基因的更稳定表达有关。通过阐明ORI-P和K-MAR的复制，分布和维护机制以及基因稳定的表达机制，人们认为将来将在未来提供有用的信息来开发基因治疗的向量。