Elucidation of the mechanisms of latent replication and genome maintenance in KSHV.

阐明 KSHV 中潜在复制和基因组维持的机制。

基本信息

批准号：
19790336
负责人：
OHSAKI Eriko
金额：
$ 2.38万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790336/
关键词：
分子 KSHV 潜伏感染ゲノム複製 LANA 核マトリックス宿主複製開始因子

项目摘要

カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)は細胞周期に同調した複製と分裂時の均等なゲノム分配機構により潜伏感染を維持している。KSHVゲノムの潜伏感染複製にはウイルス因子LANAと複製開始起点(ori-P)としてTerminal repeat(TR)が必要であり,ORC, Cdc6, Cdt1などの宿主複製開始因子(pre-RC)を集結させて達成されると考えられる。本研究では,LANAが難溶性分画(核マトリックス分画)へ集積することを明らかにした。この結果はIFAによる細胞内局在と一致した。さらに,TR挿入プラスミドの複製にはLANA の核マトリックス分画への局在が必要であった。細胞分画後のOri-P領域の局在をPCRにより調べたところ,LANAの局在と同様に核マトリックス分画に局在が見られた。LANAは細胞周期を通じてこの分画に存在する一方,TR はG1期特異的な局在であった。よってLANA依存的にOri-P領域が核マトリックス上にリクルートされ,G1期にpre-RCの形成が行なわれることで複製を開始し,複製後のDNA 領域は核マトリックス上から遊離することが示唆された。本結果は, LANAとpre-RCとの相互作用を重要視したこれまでの見解について問題提起するものである。また,KSHVゲノム内のTR近傍にmatrix-attachment region(K-MAR)の特徴を示す領域(K-MAR)を見いだした。K-MAR を挿入したGFP発現G418耐性プラスミドを導入した細胞は薬剤選択下で有意に高いコロニー形成能を示した。K-MARは自立複製能力を持たないことから,薬剤耐性遺伝子のより安定な発現に関与していることが示唆された。Ori-PやK-MARによる複製・分配・維持機構や遺伝子安定発現機構を明らかにすることで,将来的には遺伝子治療用ベクター開発にも有用な情報が得られるものと考えられる。

Caposian肉瘤相关的疱疹病毒（KSHV）在细胞周期中保持了隐藏的感染，并在分裂时具有相等的基因组分布机制。 KSHV基因组的隐藏感染必须使病毒因子LANA和末端重复（TR）作为起点（ORI-P），并收集住房重复的起始因子（PRE-RC），例如ORC，CDC6，CDT1（PRE- PRE-- RC）。这项研究指出，拉娜会积聚成绑扎的绘画（核基质划分）。该结果与IFA的单元内站一致。此外，需要将TR插入质粒的重复位于LANA的核基质分部中。根据细胞分裂之后Ori-P区域的位置的PCR，在核基质分裂中发现了定位，如LANA所在地。尽管Lana在整个细胞周期中都存在于该分裂中，但TR是G1术语的特殊性。因此，建议在核基质上募集LANA依赖性的ORI-P区域，在G1项中形成前RC，并在重复后与核基质分开后的DNA区域。该结果是发行过去的观点，强调LANA与Pre-Rc之间的相互作用。此外，我们发现了一个区域（K-MAR），该区域显示了KSHV基因组TR附近的基质 - 跟踪区域（K-MAR）的特征。在药物选择下，用K-MAR插入的GFP表达G418抗性质粒具有明显高的菌落形成能力。有人提出，K-MAR参与了耐药基因的更稳定表达，因为它没有独立的重复能力。通过阐明ORI-P和K-MAR的重复，分布和维护机制以及遗传稳定的表达机制，可以认为将来将获得对基因治疗载体发展有用的信息。