アブラナ科自家不和合性分子ネットワークに関する遺伝学的・分子生物学的解析

十字花科自交不亲和性分子网络的遗传与分子生物学分析

基本信息

批准号：
19880004
负责人：
諏訪部圭太
金额：
$ 1.77万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

アブラナ科自家不和合性における認識反応以降の分子メカニズムを明らかにすることを目標に、Brassica rapa自家和合性突然変異体での遺伝解析とモデル植物シロイヌナズナ(自家和合性)での自家不和合性形質転換体の作出を試みた。1.B. rapaに関する研究B. rapa自家和合性突然変異体5系統と自家不和合性系統の交配より作出したF_1を育成し、各交配系統約100粒のF_2種子を獲得した。採種後、各後代F_2集団より20個体を任意選抜し、温室内で栽培し自家不和合性表現型を決定した。遺伝子型については、B. rapa連鎖地図に座上する113個のSSRマーカーの多型を各両親間で調査し、約80個の多型を有するSSRマーカーを選抜した。これらSSRマーカーについて、後代F_2集団での各遺伝子座の遺伝子型をPCR法によって決定した。2.シロイヌナズナに関する研究3種の異なるエコタイプ(#1、#2、Col-0)より自家不和合性雄蕊認識因子SP11/SCRをPCR法により単離し、その塩基配列を解読した。その結果、C末端側領域にすべてのエコタイプに共通する変異を見出した。また、エコタイプ#1、#2ではN末端領域に5bpの欠失、Col-0では変異境界領域に13bpの重複が存在することを見出した。これら変異をPCR法によって修復し、正常復元型SP11を構築した。タペート細胞特異的プロモーターと共に形質転換用ベクターに連結し、エコタイプ#1、#2に遺伝子導入した。各エコタイプよりT_0種子を獲得し、現在、植物体の育成中である。

为了阐明胸前RAPA自体兼容性识别响应后的分子机制，我们试图分析甘蓝植物RAPA自动相容性突变体中的遗传学，并在模型植物拟南芥中产生自身兼容的转化体（自兼容性）。 1.B. RAPA F_1的研究是从五个Rapa自身兼容突变菌株和自不兼容菌株的交配中进行的，并且在每个配合线中获得了大约100个F_2种子。播种后，从每个后代F_2种群中选择选择了20个人，并在温室中培养以确定自我兼容的表型。对于基因型，在每个父母之间研究了位于B. rapa链接图上的113个SSR标记的多态性，选择了大约80个多态性的SSR标记。对于这些SSR标记，由PCR确定后代F_2种群中每个基因座的基因型。 2。拟南芥的研究：通过PCR方法从三种不同的生态型（＃1，＃2，col-0）中分离出自兼容的雄蕊识别因子SP11/SCR，并解码了基础序列。结果，我们发现了C末端区域所有生态型共有的突变。我们还发现，Ecotypes＃1和＃2的N末端区域有5bp缺失，而Col-0中突变边界区域的13bp重叠。这些突变通过PCR修复，以构建正常恢复的SP11。将所得的细胞特异性启动子连接到转化载体中，并转染到Ecotypes＃1和＃2中。他们已经从每种生态类型中获取了T_0种子，目前正在种植植物。