リボ多糖(LPS)刺激によるNF-kB活性化機構

核糖多糖（LPS）刺激诱导的 NF-kB 激活机制

• 批准号: 10163228
• 负责人: 牟田 達史
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163228/
• 关键词: プロテアーゼ; 炎症; 自然免疫; NF-kB; リボ多糖; 単球; マクロファージ; 生体防御

NF-κBは、免疫グロブリンのκ鎖のエンハンサー領域に結合する転写因子として発見されたが、現在では、MHC class Iや、TNF-α、IL-2、-6、-8などのサイトカイン、細胞接着因子、NO合成酵素など、多種の炎症反応に関与する遺伝子の発現制御にかかわっていることが明らかにされている。TNF-α刺激時には、NF-κBの細胞質におけるinhibitorとしてはたらくIκBαのリン酸化とそれに引き続くプロテアソームによる分解が惹起され、NF-κBが活性化されるが、NF-κB自身によってIκBαの転写が亢進し、その活性化は一時的なものに留まる。一方、LPS刺激時には、IκBαに加え、IκBβが分解を受け、持続的な活性化が起きる。マウスの単球/マクロファージ系由来の培養細胞であるRAW264.7細胞を用いてTNFαとLPS刺激時の細胞の形態変化を比較したところ、LPS刺激時にのみ、マクロファージ様細胞への分化がみられた。すなわち、細胞の持続的な活性化、分化にはIκBαのみならず、IκBβの活性化による持続的にNF-κBの活性化が必要であることが示唆された。そこで、IκBβのリン酸化および分解に関わるタンパク質を検索するため、IκBβをbaitに用いたyeast two hybrid系を用いて、スクリーニングを行った。実際には、全長のIκBβをbaitに用いるとbait単独で擬陽性のシグナルが出てしまうことが判明したため、C末端部を欠損した変異体を用いてスクリーニングを行った。これまでに、未知のタンパク質を含む数種のクローンが得られ、現在、その機能を解析中である。

NF-κB作为与免疫球蛋白的κ链的增强子区域结合的转录因子而被发现，但现在已知其是与免疫球蛋白的κ链的增强子区域结合的转录因子。它参与调节多种与炎症反应有关的基因的表达，例如粘附因子和NO合酶。在 TNF-α 刺激下，NF-κB 通过 IκBα 的磷酸化而被激活，IκBα 在细胞质中充当 NF-κB 的抑制剂，随后被蛋白酶体降解，但 NF-κB 本身会增强 IκBα 的转录，其激活仍然是暂时的。另一方面，在 LPS 刺激下，除了 IκBα 之外，IκBβ 也被降解，导致持续激活。使用RAW264.7细胞（源自小鼠单核细胞/巨噬细胞谱系的培养细胞），我们比较了TNFα和LPS刺激后细胞的形态变化，发现仅在LPS刺激后才观察到向巨噬细胞样细胞的分化。 。换句话说，细胞的持续活化和分化不仅需要IκBα，还需要通过IκBβ的活化来持续活化NF-κB。因此，为了寻找参与IκBβ磷酸化和降解的蛋白质，我们使用以IκBβ为诱饵的酵母二杂交系统进行了筛选。事实上，发现当使用全长IκBβ作为诱饵时，单独使用诱饵时会产生假阳性信号，因此使用缺少C末端部分的突变体进行筛选。目前，已获得多个含有未知蛋白的克隆，目前正在分析其功能。