神経新生に関与するリゾホスファチジン酸受容体のG蛋白質を介する情報伝達

溶血磷脂酸受体G蛋白参与神经发生的信息传递

基本信息

批准号：
10155223
负责人：
植田弘師
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経新生に関連すると考えられるリゾホスファチジン酸(LPA)受容体(vzg-1及び未同定の受容体)の細胞内情報伝達機構の解明を目的として、バキュロウイルス/昆虫細胞発現系及びアフリカツメガエル卵母細胞発現系による研究を行った。バキュロウイルス発現系を用いた実験では、すでにクローニングされているvzg-1を各Gタンパク(G_S,G_<il>,G_<oA>,G_<11>)と共発現させ、LPA依存的[^<35>S]GTPγS結合活性を指標に機能的連関を解析した。その結果、LPA受容体とG_<il>、G_<oA>、G_<11>を共発現させた膜標品では、LPA濃度依存的に[^<35>S]GTPγS結合活性上昇が見られ、これらGタンパクとvzg-1が連関することを明らかにした。G_Sとの連関は見られなかった。また、この共発現系でLPA非存在下においても、vzg-1発現によりG_<il>の[^<35>S]GTPγS結合活性上昇が観察された。リガンド存在下で連関するG_<oA>に対しては、LPA非存在下での活性化は見られなかった。さらにG_<il>で見られるLPA非依存的な活性上昇が、GTPγSに対する親和性の増大によることをスキャッチャード解析により確認し、vzg-1がLPA非存在下でもG_<il>を活性化できる内在活性を有する事が示唆された。一方、アフリカツメガエル卵母細胞でLPAにより誘発される内向き電流を観察し、その細胞内情報伝達機構について検討を行った。その結果、LPAの繰り返し投与による内向き電流の誘発には急速な脱感作が見られるが、その脱感作がPKA阻害剤により抑制されること、LPAによる内向き電流の発生は百日咳毒素非感受性であり、PLCの活性化を必要とし、IP_3受容体チャネルを介してthapsigargin感受性Ca貯蔵部位から遊離したCa^<2+>によるCa^<2+>感受性Cl^-チャネルの活性化によるものであることを明らかにした。

为了阐明被认为与神经发生相关的溶血磷脂酸（LPA）受体（vzg-1和未鉴定的受体）的细胞内信号转导机制，我们使用杆状病毒/昆虫细胞表达系统和非洲爪蟾卵母细胞进行了研究。使用细胞表达系统。在使用杆状病毒表达系统的实验中，已经克隆的vzg-1与每个G蛋白（G_S、G_<il>、G_<oA>、G_<11>）共表达，并且依赖于LPA[^使用35S]GTPγS结合活性作为指标来分析功能关系。结果，在共表达LPA受体和G_<11>、G_<oA>和G_<11>的膜制剂中，在LPA浓度下观察到[^ 35 S]GTPγS结合活性增加。依赖的方式表明这些G蛋白和vzg-1相关。没有观察到与 G_S 的关联。此外，在该共表达系统中，即使在不存在LPA的情况下，由于vzg-1表达，也观察到G_11的[^ 35 S]GTPγS结合活性的增加。没有观察到G_<oA>的激活，其在存在配体且不存在LPA的情况下相关。此外，Scatchard分析证实，在G_<il>中观察到的不依赖LPA的活性增加是由于对GTPγS的亲和力增加，并且表明vzg-1甚至在不存在LPA的情况下也激活G_<i>。内在活动。另一方面，我们观察了爪蟾卵母细胞中LPA诱导的内向电流，并研究了细胞内信号转导机制。结果，通过重复给予LPA，在诱导内向电流中观察到快速脱敏，但是这种脱敏被PKA抑制剂抑制，并且在不存在百日咳毒素敏感的情况下观察到LPA产生内向电流，需要激活。据揭示，这是由于从毒胡萝卜素敏感的Ca储存位点经由IP_3受体通道释放的Ca ^ 2+ 激活了Ca ^ 2+ 敏感的Cl ^- 通道。