内因性マリファナ様物質アナンダミドの代謝酵素の研究

内源性大麻样物质anandamide代谢酶的研究

基本信息

批准号：
08670179
负责人：
上田夏生
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アナンダミド(アラキドニルエタノールアミド)は内因性のカンナビノイド受容体アゴニストとして発見され、種々のマリファナ様生物活性を示すことが報告されている。アナンダミドは何らかの細胞刺激によって生成し、作用後すみやかに遊離アラキドン酸とエタノールアミンに加水分解されて不活化されるものと考えられている。我々はこの分解反応を触媒する加水分解酵素をブタ脳のミクロソーム画分から部分精製し、この酵素が、高濃度のエタノールアミン存在下では、逆にアラキドン酸とエタノールアミンの脱水縮合反応により、アナンダミドを生成することを示唆した。本研究では、アナンダミド加水分解酵素活性とアナンダミド合成酵素活性を同時に測定することにより、この酵素のラットにおける臓器分布について検討した。種々の組織から得たホモジネートを酵素源に用いて両酵素活性を調べると、肝臓で断然強く、次いで、脳、精巣、耳下腺などで強い酵素活性が認められた。多くの臓器で加水分解酵素活性は合成酵素活性に匹敵する比活性を示したが、小腸では加水分解酵素活性に比して約5倍高い合成酵素活性を認めた。我々は、小腸からアセトンで抽出される脂肪酸などの物質が、加水分解反応を合成反応よりも強く阻害することを見出した。そこで、種々の臓器のホモジネートをアセトンで処理した後にあらためて酵素活性を測定すると、小腸の加水分解酵素の比活性は2.0nmol/min/mg蛋白で、肝臓に次ぐ高さであった。また、アナンダミド加水分解酵素活性を有する「脂肪酸アミド水解酵素」のcDNAプローブを用いてノザンブロッティングを行うと、小腸では肝臓に次いで多量のmRNAが検出された。

Anandamide（花生四烯乙醇酰胺）被发现是一种内源性大麻素受体激动剂，据报道具有多种类似大麻的生物活性。据认为，花生四烯酸乙醇胺是由某种细胞刺激产生的，作用后立即水解成游离的花生四烯酸和乙醇胺并失活。我们从猪脑微粒体部分中部分纯化了催化该分解反应的水解酶，发现在高浓度乙醇胺存在下，该酶通过花生四烯酸和乙醇胺的脱水缩合反应相反地降解花生四烯酸。它被生成。在本研究中，我们通过同时测量大麻素水解酶活性和大麻素合成酶活性来研究该酶在大鼠体内的器官分布。当使用从不同组织获得的匀浆作为酶源来检查这两种酶的活性时，迄今为止，肝脏中的酶活性最强，其次是脑、睾丸和腮腺。在许多器官中，水解酶活性表现出与合成酶活性相当的比活性，但在小肠中，合成酶活性比水解酶活性高约5倍。我们发现，用丙酮从小肠提取的脂肪酸等物质比合成反应更能抑制水解反应。因此，当用丙酮处理各器官的匀浆并再次测量酶活性时，小肠中水解酶的比活性为2.0nmol/min/mg蛋白质，仅次于肝脏中的第二高。此外，当使用具有anandamide水解酶活性的脂肪酸酰胺水解酶的cDNA探针进行Northern印迹时，在小肠中检测到的mRNA量仅次于肝脏。