ヌクレオチド除去修復におけるクロマチン制御とDDBの機能

染色质控制和 DDB 在核苷酸切除修复中的功能

基本信息

批准号：
18710044
负责人：
若杉光生
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヌクレオチド除去修復におけるクロマチン構造変換機構とDDBの機能を明らかにするために、主に以下の点について解析を行った。まず、DDBとクロマチンリモデリングに関わるタンパク質との関連性を調べるために、免疫沈降法によりDDBと共沈降するタンパク質をウェスタンブロッティングにより解析した。その結果、今までDDBと相互作用することが知られていなかったタンパク質が含まれることがわかったので、細胞内で共発現することによりDDBとの相互作用を確認した。また興味深いことには、細胞に紫外線を照射した時に、そのタンパク質がDNA損傷部位に集積することがわかり、紫外線によるDNA損傷応答において何らかの役割を担っていることが示唆された。現在、ヌクレオチド除去修復反応に及ぼす影響についてさらに詳細な解析を進めている。一方、ニワトリDT40細胞を用いて作成したDDB1のコンディショナルノックアウト細胞で、紫外線以外のDNA傷害剤に対する応答についても解析を行った。その結果、DNA複製を介して二本鎖切断を生じるcamptothecin(CPT)を処理すると、野生型DT40細胞はG_2/M期に停止するのに対し、DDB1を欠損させた場合にはG_2/M期まで進まず、S期の初期で停止することがわかった。さらに、ミトコンドリアの還元酵素活性を指標にCPTに対する感受性について検討したところ、DDB1を欠損させると感受性が有意に増加することがわかった。したがって、DDB1がCPTによるDNA損傷応答において何らかの役割を担っていることが推察され、このDDB1の新しい機能に注目して解析を行っている。

为了阐明染色质结构转化机理的功能和DDB在恢复核苷酸去除中的功能，主要分析了以下几点。首先，为了检查DDB与染色质递增建模涉及的蛋白质之间的关系，我们分析了通过免疫子与DDB定居的蛋白质。结果，发现蛋白质尚不知道具有DDB，因此我们通过细胞中的CO表达证实了与DDB的相互作用。有趣的是，当细胞被紫外线照射时，发现该蛋白在DNA损伤部位积聚，这表明它在紫外线引起的DNA损伤反应中起着一定作用。目前，对核苷酸去除修复反应的分析进行了进一步的详细分析。另一方面，在紫外线以外的其他DNA损伤剂上分析了使用鸡DT40细胞产生的DDB1的条件基因敲除细胞。结果，如果在G_2/m周期中关闭了双链切割的camptothecin（CPT），则关闭了野生-Type DT40细胞，但G_2/m周期丢失了发现它将在S时期的早期停止。此外，发现线粒体的还原酶活性是CPT敏感性的指标指标，发现赤字DDB1将显着提高敏感性。因此，假定DDB1通过CPT在DNA损伤反应中起作用，并且正在分析该DDB1的新功能。