柑橘類脱顆粒抑制成分の腸管における代謝・吸収と活性発現に関する研究

柑橘脱颗粒抑制剂的肠道代谢、吸收及活性表达研究

基本信息

批准号：
18700610
负责人：
小林彰子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Takasaki University of Health and Welfare
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

すでに我々は温州みかんパウダー(日東富士製粉(株))の50%メタノール抽出画分が肥満細胞からの脱顆粒を抑制することを報告している。本年度は、温州みかんパウダーに含まれる脱顆粒抑制成分を解析した。極性の異なる3種の溶媒、即ちエタノール濃度が0、50、99.5%の水溶液でそれぞれ抽出し、減圧乾固後、最終濃度5mgおよび0.5mg/mlで脱顆粒抑制試験に供した。ラット好塩基球性細胞株RBL-2H3を用い、β-ヘキソサミニダーゼ(酵素活性測定法)およびヒスタミン(HPLC on-column法)の遊離からIgE依存性脱顆粒度を測定した。ポジティブコントロールとしてwortmannin(25μM)を用いた。その結果、エタノール濃度50%および99.5%抽出画分が、β-ヘキソサミニダーゼおよびヒスタミンの遊離を抑制した。99.5%および50%エタノール抽出画分から各種クロマトグラフィーにより活性成分を単離した。EI-MS、FAB-MSとこれらのHR-MS、およびNMR等の機器分析により、4種のポリメトキシフラボン(4',5,7,8-tetramethoxyflavone、tangeretin、nobiletinおよび3,3',4',5,6,7,8-heptamethoxyflavone)および2種のフラバノン配糖体(hesperidinおよびnarirutin)を構造決定した。それぞれの化合物の脱顆粒抑制試験の結果、ヒスタミン遊離とβヘキソサミニダーゼ共に、nobiretin、tangeretin、3,3',4',5,6,7,8-heptamethoxyflavoneは濃度依存的抑制活性を示したのに対し、配糖体であるhesperidinは活性を示さなかった。また、我々は配糖体であるヘスペリジンが腸管上皮細胞上で代謝されヘスペレチンとなることにより抗アレルギー作用を発揮することを報告している。本年度は腸管上皮細胞のモデルであるCaco-2細胞を用いてヘスペレチンおよびヘスペリジンの腸管透過機構を明らかにした。透過性膜上に単層培養したCaco-2細胞に被験物を添加し、管腔側から基底膜側、基底膜側から管腔側への透過性を測定した。測定にはクーロメトリック式HPLC-ECDを用いた。ヘスペレチンは管腔側から基底膜側へエネルギー依存的に極性輸送され、能動的透過機作を示した。ヘスペリジンの透過速度はヘスペレチンの約1/400で、受動的透過機作を示した。現在、さらに詳細なヘスペレチンの腸管透過メカニズムの解析を行っている。

我们已经报道了50％Wenzhou Mandarin粉末提取的甲醇（Nitto Fuji Milling Co.，Ltd。）抑制了肥大细胞中的颗粒。今年，我们分析了Atsushi普通话粉中包含的降级受控组件。将三种具有不同极性的溶剂用0％，50％，99.5％乙醇浓度的水溶液提取，在解压缩干燥后，最终浓度为5 mg和0.5 mg/ml，以脱粒抑制测试。通过使用基于大鼠的棒球基碱细胞RBL-2H3的β-己糖胺酶（酶活性测量方法）和组胺（HPLC术中法）（酶活性测量法）和组胺（HPLC术中法）的释放来测量IgE依赖性降解水平。 Wortmannin（25μM）用作阳性对照。结果，乙醇浓度为50％和99.5％，提取了β-己糖胺酶和组胺的释放。从提取的99.5％和50％乙醇中分离出各种色谱法。 EI-MS，FAB-MS和这些HR-MS和NMR分析设备分析，四个聚甲氧基液（4'，5,7,8-四甲氧基氟法酮，橘子，Noviletin，Noviletin和3,3'，4，4，4，4，4，4，4 ，已确定，4。，5,6,7,8-甲氧氟氟氟此类）和两种黄酮糖（脱发素和毒素）。由于对每种化合物的脱粒抑制检验，组胺和β-HEX索氨酰酶都显示了Nobiretin，Tangeretin，3,3'，4'，5,6,6,6,7,8-甲氧氟氟氟氟此次均浓度依赖性活性另一方面，糖苷Hesperidin，没有显示活性。我们还报告说，糖原（一种糖原）在肠上皮细胞上被代谢，并通过成为硫代素而具有抗过敏作用。今年，使用肠道上皮细胞模型的Caco-2细胞揭示了黄绿蛋白和紫杉胺的肠渗透机制。将受试者添加到在渗透膜中培养的CACO-2细胞中，并从管侧到碱膜侧和基底膜侧至管侧测量渗透率。 Coulometric HPLC-ECD用于测量。用能量从管侧到基本膜侧的能量依赖性将紫刺激素运输，表明有效的透明工作。紫杉胺的透明速度约为Hesperetin的1/400，表明被动透明的工作。目前，我们正在分析一种更详细的墨西哥蛋白肠渗透率机制。