活動依存的グリシン受容体凝集の研究

活性依赖性甘氨酸受体聚集的研究

基本信息

批准号：
18680033
负责人：
平田普三
金额：
$ 19.05万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

アミノ酸であるグリシンは抑制性神経伝達物質であり、グリシン受容体は脊椎動物の中枢神経に広く存在している。グリシン受容体を構成する分子には分子量48kDのα、58kDのβという2種類のサブユニットがあるが、受容体としてはαサブユニットのみから成る5量体とαサブユニット2つとβサブユニット3つから成る5量体があり、前者はシナプス局在できないが、後者はシナプスに局在し、シナプス伝達に関わると考えられている。ラットの培養細胞を用いた過去の知見から、グリシン受容体の凝集が受容体の活性に依存することが示唆されていた。本研究はゼブラフィッシュを用いて、グリシン受容体の凝集の活動依存性を解析することを目的とする。平成18年度はグリシン受容体凝集の時間経過を脊髄ニューロンで解析し、受精後24時間のステージでは凝集は観察されないが、48時間から96時間にかけてクラスターが増加し、96時間から120時間にかけて減少し、安定する特徴的な変動をすることを見いだした。ストリキニンはグリシン受容体を特異的に阻害することが知られている。発生過程のゼブラフィッシュにストリキニンを作用させてグリシン受容体を介する神経伝達を阻害すると、グリシン受容体のクラスターが見られなくなった。グリシン受容体遺伝子の転写、翻訳、また膜表面へのタンパクの発現には異常はないようで、凝集に異常があると考えられた。これはグリシン受容体の凝集が発生過程においても活動依存的であることを示すものでもあった。脊髄のニューロンで解析する限り、個々のニューロンの分裂や総数が問題になるので、平成19年度は特定の細胞でクラスター数を解析する実験系を確立する目的で、後脳に1対存在するマウスナー細胞に注目して、この同定可能ニューロンでグリシン受容体凝集を解析した。マウスナー細胞は抗ニューロフィラメント抗体(3A10)で染色される後脳第4分節の大きな細胞として同定できた。マウスナー細胞でも受容体クラスターは一過的に増加した後に一定数に落ち着く傾向が見られ、これも活動依存性を示唆するものであった。以上より、ゼブラフィッシュにストリキニンを加えるという単純な実験により、発生期のグリシン受容体凝集、すなわちグリシン作動性シナプスの形成を研究する新しい実験系が確立したと言え、現在その分子基盤の解析を進めている。

甘氨酸是一种氨基酸，是一种抑制的神经递质，甘氨酸受体在脊椎动物的中枢神经系统中广泛发现。在构成甘氨酸受体的分子中，有两种类型的亚单位，分子量为48 kd的α，而分子中有58KDβ，但作为受体，只有α亚基和两个α-亚基3和β亚基3。有五个数量，前者不能位于突触中，但是后者位于突触中，被认为与突触传播有关。使用大鼠培养细胞的过去知识表明，甘氨酸受体的团聚取决于受体的活性。这项研究旨在使用斑马鱼分析甘氨酸受体骨料的依赖性。在2006年，在脊柱神经元中分析了甘氨酸最近聚集的通过，并且在受精后24小时未观察到聚集，但是簇的数量从48小时增加到96小时，从96小时减少到120小时。，我发现一种稳定的独特波动。众所周知，斯特里依金特异性抑制甘氨酸受体。在发生strikinin的发生的过程中，乙烯蛋白在发生斑马鱼上作用于斑马鱼时，不再看到甘氨酸受体簇。看来转录，甘氨酸受体基因的翻译和蛋白质在膜表面的表达没有异常，并且聚集异常。这也表明甘氨酸受体的聚集取决于发生的过程。至于分析脊髓的神经元，单个神经元的分裂和总数将是一个问题，因此，在2007年，一个 - 脑 - 脑是一个鼠标，目的是建立一个实验系统来分析实验系统特定细胞中的簇的数量。测量值细胞可以在大脑之后的第四个中被鉴定为大细胞，该细胞用抗透射抗体染色（3A10）。在慕斯细胞中，受体簇在过度增加后倾向于定居于一定数量，这也表明活性。从上面，一个简单的实验在斑马鱼中添加了strikinin，已经建立了一个新的实验系统，以研究甘氨酸受体团聚的形成，即甘氨酸工作突触，目前正在分析分子基础。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

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专利数量（0）

小型魚類を用いた筋疾患モデル研究

小鱼肌肉疾病模型研究

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
平田普三;他;Louis Saint-Amant;平田普三;平田普三;平田普三;平田普三
通讯作者：
平田普三

Non-sense mutations in the dihydropyridine receptor β1 gene, CACNB1, paralyze zebrafish relaxed mutants.

二氢吡啶受体 β1 基因 CACNB1 的无义突变使斑马鱼松弛突变体瘫痪。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Cell Calcium 39・2
影响因子：
0
作者：
Liu Z;Nukazuka A;Takagi S;Weibin Zhou
通讯作者：
Weibin Zhou

Zebrafish relatively-relaxde mutants have a ryanodine receptor defect, show slow swimming and provide a model of multi-minicore disease

斑马鱼相对松弛突变体具有兰尼碱受体缺陷，表现出缓慢的游动并提供了多微核心疾病的模型

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Development 134
影响因子：
0
作者：
Susumu Higa;所崇;北島勲;大塚稔久;Toshihisa Ohtsuka;所崇比嘉進北島勲大塚稔久;Louis Saint-Amant;比嘉進井上英二所崇北島勲大塚稔久;平田普三
通讯作者：
平田普三

ゼブラフィッシュを用いた運動の生理遺伝学的解

斑马鱼运动的生理遗传分析

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tagawa K;et. al.,;榎戸靖;Tagawa et al.;Marubuchi et al.;榎戸靖;榎戸靖;榎戸靖;榎戸靖;榎戸靖;Louis Saint-Amant;平田普三;平田普三;Weibin Zhou;岡新一;平田普三;平田普三;渡邉貴樹;Eric Horstick;Sean Low;平田普三;平田普三
通讯作者：
平田普三

Impaired fatty acid utilization in thioredoxin binding protein-2 (TBP-2)-deficient mice : a unique animal model of Reye syndrome.

硫氧还蛋白结合蛋白 2 (TBP-2) 缺陷小鼠的脂肪酸利用受损：雷氏综合征的独特动物模型。