ニワトリ下垂体特異的転写因子Pit-1遺伝子の構造と発現調節機構に関する研究

鸡垂体特异性转录因子Pit-1基因结构及表达调控机制研究

• 批准号: 07760265
• 负责人: 大久保 武
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760265/
• 关键词: Chicken; Pit-1; Prolactin; Growth Horwone

ニワトリPit-1遺伝子のクローニングを行い、その構造解析を行った。ニワトリPit-1遺伝子は6つのエクソンと5つのイントロンからなる構造を有していた。クローン化されたPit-1遺伝子は5kbに及ぶ5'プロモーター領域を含んでおり、そのうちエクソン1に近い1kbについてその構造を明らかにした。哺乳類では転写開始点より1kb以内のエンハンサー領域が知られているが、コンピューターによるプロモーター領域の検索では、哺乳類で明らかになっている転写調節領域は認められなかった。下垂体におけるPit-1 mRNAの発現量は哺乳類に比べ非常に少なく、ノーザンブロットハイブリダイゼーションで検出する事が困難であった。プライマー伸長法による転写開始点の決定は行っていないが、クローニングされたニワトリPit-1 cDNAとPit-1遺伝子の相同性の比較からPit-1遺伝子はTATAボックスを欠く遺伝子であることが推測され、RNAポリメラーゼはTATAボックス以外のプロモーター配列を認識して転写を行っているものと考えられた。また本年度中にブリ成長ホルモン遺伝子の構造解析により、魚類と鳥類のPit-1結合配列が哺乳類とは異なる可能性を示唆した。この新規のPit-1結合領域がPit-1遺伝子に存在することが見いだされ、ニワトリPit-1遺伝子も哺乳類同様Pit-1自身により転写が調節されている可能性が示唆された。本研究ではCAT assayによるプロモーター領域の解析を行う予定であったが、哺乳類由来の培養細胞中ではレポーター遺伝子の活性が微弱であり十分な情報を得るには至らなかった。現在ニワトリ肝癌細胞のLMHを用いたCAT assayを行うと同時に、構造の明らかになっていない4kbのプロモーター領域の構造を解析中である。これらプロモーター領域の構造とCAT assayによるプロモーター活性の解析を詳細に行うことにより、鳥類のPit-1の発現調節機構の哺乳類との違いが明らかになるものと期待される。

我们克隆了鸡Pit-1基因并分析了其结构。鸡Pit-1基因的结构由六个外显子和五个内含子组成。克隆的Pit-1基因含有5kb的5'启动子区，其中靠近外显子1的1kb的结构已被阐明。在哺乳动物中，转录起始点 1 kb 内的增强子区域是已知的，但对启动子区域的计算机辅助搜索显示哺乳动物中没有已知的转录调控区域。与哺乳动物相比，垂体中Pit-1 mRNA的表达水平非常低，Northern印迹杂交很难检测到。尽管通过引物延伸尚未确定转录起始位点，但克隆的鸡Pit-1 cDNA与Pit-1基因之间的同源性比较表明Pit-1基因缺乏TATA框，人们认为RNA聚合酶。识别 TATA 盒以外的启动子序列并执行转录。此外，今年对黄尾鱼生长激素基因的结构分析表明，鱼类和鸟类中的 Pit-1 结合序列可能与哺乳动物中的不同。这个新的Pit-1结合区被发现存在于Pit-1基因中，这表明鸡Pit-1基因的转录可能受到Pit-1本身的调节，就像在哺乳动物中一样。在本研究中，我们计划通过CAT分析来分析启动子区域，但报告基因在哺乳动物来源的培养细胞中活性较弱，我们无法获得足够的信息。目前，我们正在利用鸡肝癌细胞的LMH进行CAT检测，同时分析4kb启动子区域的结构，其结构尚不清楚。预计通过CAT分析对这些启动子区域的结构和启动子活性进行详细分析将揭示鸟类和哺乳动物中Pit-1表达调控机制的差异。