加齢に伴う基礎免疫力低下の分子機構の解明

阐明与年龄相关的基础免疫力下降的分子机制

• 批准号: 07J45139
• 负责人: 浅井 あづさ (氏家 あづさ)
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute for Longevity Sciences,NCGG
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J45139/
• 关键词: zizimin2; CDM family; cdc42; 樹状細胞; 獲得免疫応答; モノクローナル抗体; CDMファミリー; 免疫老化

我々はテロメラーゼとzizimin2という加齢に伴い発現変化する二つの分子の機能解析を通じて、加齢に伴う免疫機能低下のメカニズムの解明にアプローチしていきたいと考えている。今回、我々が樹立したzizimin2モノクローナル抗体を用いて獲得免疫応答時の抗原提示において非常に重要な樹状細胞におけるzizimin2の機能解析を行った。我々はzizimn2の生化学的な機能解析を進めるために、zizimin2を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。得られた抗体は、ウェスタンブロッティングと免疫組織染色において強制発現させたzizimin2と内在性のzizimin2の両者を特異的に検出した。次に樹状細胞におけるzizimin2の機能について検討を行った。野生型の樹状細胞を抗FcγRII/III抗体(2.4G2)あるいはLPSあるいは抗CD40抗体(FGK)で刺激し活性化させたときのzizimin2の発現変化についてウェスタンブロッティング法を用いて比較検討を行った。結果、抗FcγRII/III抗体あるいはLPSで刺激したときにzizimin2の発現上昇が認められたが、一方、抗CD40抗体で刺激した時にはzizimin2の発現に変化は認められなかった。この結果から、zizimin2はFcγRあるいはTLR4の下流に存在することが示された。さらに免疫組織染色により詳細な検討を行ったところ、未刺激の樹状細胞において、zizimin2は細胞質と細胞膜に局在し、抗FcγRII/III抗体で刺激した時では、細胞質と細胞膜に存在するzizimin2の発現が増強し、特に細胞膜での発現増強が観察された。以上のことからzizimin2はPHドメインを介して細胞膜に局在し、cdc42を活性化することでFcγRあるいはTLR4からのシグナルに関与していることが示唆された。

我们希望通过端粒酶和 zizimin2（两种表达随年龄变化的分子）的功能分析来阐明与年龄相关的免疫功能下降的机制。在这里，我们使用我们建立的 zizimin2 单克隆抗体来分析 zizimin2 在树突状细胞中的功能，这对于获得性免疫反应期间的抗原呈递极其重要。我们创建了一种特异性识别 zizimin2 的单克隆抗体，以分析 zizimn2 的生化功能。获得的抗体在蛋白质印迹和免疫组织学染色中特异性检测强制表达的zizimin2和内源性zizimin2。接下来，我们研究了 zizimin2 在树突状细胞中的功能。使用蛋白质印迹法，我们比较了用抗 FcγRII/III 抗体 (2.4G2)、LPS 或抗 CD40 抗体 (FGK) 刺激和激活野生型树突状细胞时 zizimin2 表达的变化。结果，当用抗FcγRII/III抗体或LPS刺激时，观察到zizimin2的表达增加，而当用抗CD40抗体刺激时，观察到zizimin2的表达没有变化。该结果表明zizimin2存在于FcγR或TLR4的下游。此外，使用免疫组织化学染色的详细研究表明，在未刺激的树突状细胞中，zizimin2定位于细胞质和细胞膜，并且当用抗FcγRII/III抗体刺激时，zizimin2定位于细胞质和细胞膜，表达增强。尤其是在细胞膜上。这些结果表明 zizimin2 通过其 PH 结构域定位于细胞膜，并通过激活 CDC42 参与来自 FcγR 或 TLR4 的信号。

项目成果

Zizimin2(DOCKII)のモノクローナル抗体の樹立と樹状細胞における機能解析

Zizimin2（DOCKII）单克隆抗体的建立及树突状细胞功能分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 上田 啓貴;三浦 英生;上田 啓貴;Nobuki Ueta;Nobuki Ueta;上田 啓貴;竹田 香織;竹田 香織;竹田 香織[邦訳](スザンナ・クレペリオ[著]);名畑太智;名畑太智;磯田 典和;磯田 典和;磯田 典和;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Azusa Asai-Ujike;浅井あづさ
• 通讯作者: 浅井あづさ

Large defects of type I allergic response in telomerase reverse trancriptase knockout mice.

端粒酶逆转录酶基因敲除小鼠I型过敏反应的大缺陷。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Leukocyte Biology. 82
• 作者: 上田 啓貴;三浦 英生;上田 啓貴;Nobuki Ueta;Nobuki Ueta;上田 啓貴;竹田 香織;竹田 香織;竹田 香織[邦訳](スザンナ・クレペリオ[著]);名畑太智;名畑太智;磯田 典和;磯田 典和;磯田 典和;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Azusa Asai-Ujike
• 通讯作者: Azusa Asai-Ujike

I型アレルギー反応におけるTERTの機能解析

TERT在I型过敏反应中的功能分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 上田 啓貴;三浦 英生;上田 啓貴;Nobuki Ueta;Nobuki Ueta;上田 啓貴;竹田 香織;竹田 香織;竹田 香織[邦訳](スザンナ・クレペリオ[著]);名畑太智;名畑太智;磯田 典和;磯田 典和;磯田 典和;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Takashi Ishigami;石上 享嗣;Azusa Asai-Ujike;浅井あづさ;浅井 あづさ
• 通讯作者: 浅井 あづさ