初代肝細胞三次元培養法の薬物代謝シミュレーターへの応用に関する研究

原代肝细胞三维培养方法在药物代谢模拟器中的应用研究

基本信息

批准号：
07750886
负责人：
松下琢
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ラット初代培養肝細胞を単層培養系とポリウレタンフォーム(PUF)三次元培養系で培養し、モデル薬物として局所麻酔剤リドカイン(脂溶性物質)と解熱鎮痛薬アセトアミノフェン(水溶性物質)を用いて、その薬物代謝能力について比較検討を行った結果、PUF三次元培養系では生体内と同様にリドカインの脱エチル化(第一相反応)・アセトアミノフェンの抱合化反応(第二相反応)が起こり、しかも従来の単層培養系よりも高い活性を長期間維持できることが示された。2.肝細胞に対する毒性作用を有する上記リドカインの投与濃度を変化させ、PUF三次元培養系と単層培養系で肝細胞の生存率の変化を調べた結果、単層培養系では比較的低濃度から生存率の低下が始まったのに対し、三次元培養系では生体内と同様な濃度で細胞毒性(生存率の低下)の発想が認められた。これらの結果から、肝細胞のPUF三次元培養系を用いることで薬物毒性試験を細胞レベルでシミュレートできる可能性が示唆された。3.レーザー出力制御機能を有する共焦点レーザー顕微鏡を用いて、三次元化した肝細胞集塊内部の生細胞の分布を調べた結果、三次元化していない肝細胞に比べて、三次元集塊化した方が生細胞の割合が多く維持されていることあが示された。このことがPUF三次元培養系で高い肝機能が維持される機能の一つと考えられる。

1、大鼠原代培养肝细胞采用单层培养系统和聚氨酯泡沫（PUF）三维培养系统培养，局麻药利多卡因（脂溶性物质）和解热镇痛药对乙酰氨基酚（水溶性物质）用作模型药物。通过比较研究，我们发现在PUF三维培养体系中，利多卡因脱乙基化（第一相反应）和对乙酰氨基酚缀合反应（第二相反应）以与体内相同的方式发生，并且表明：与分层培养系统相比，可以在更长的时间内保持更高的活性。 2.改变对肝细胞有毒性作用的利多卡因的给药浓度，并检查PUF三维培养系统和单层培养系统中肝细胞存活率的变化，结果发现浓度在单层培养系统中相对较低，但是在三维培养系统中，在与体内相似的浓度下观察到细胞毒性（存活率降低）。这些结果表明利用PUF肝细胞三维培养系统在细胞水平上模拟药物毒性试验的可能性。 3.使用具有激光输出控制功能的共聚焦激光显微镜，研究了三维肝细胞聚集体中活细胞的分布，结果表明，当细胞纯化时，活细胞的比例保持在较高的水平。这被认为是PUF三维培养体系维持高肝功能的功能之一。